詳細(xì)介紹
MALDI蛋白樣品處理試劑盒產(chǎn)品及特點(diǎn) 本產(chǎn)品用于基質(zhì)輔助激光解吸離子化(Matrix Assisted LaserDesorption Ionization,MALDI)分析,所含的基質(zhì)液是 MALDI 分析的必
不可少的關(guān)鍵成分,其主要作用一是起到分子溶劑的作用,使樣品分子分開,
但又不會(huì)使蛋白質(zhì)發(fā)生共價(jià)修飾;而是能從激光脈沖中吸收能量,使蛋白質(zhì)發(fā)生瞬間相變,用于質(zhì)譜分析。
MALDI蛋白樣品處理試劑盒本產(chǎn)品的特點(diǎn)是:
1. 即開即用,用戶不需要單獨(dú)準(zhǔn)備各種成分。
2. 經(jīng)過優(yōu)化,可用于各種樣品的 MALDI 分析。
3. 可以選擇 CCA(羥基苯丙烯酸)、DHB(2,5-二羥基苯甲酸)和 SA(芥
子酸)三種不同的基質(zhì)。CCA 適用于分子量在 5Kd 一下的蛋白質(zhì)和多
肽分析(肽指紋圖譜);DHB 適合于一般蛋白質(zhì)、多肽、低聚糖、脂和
合成多聚物的分析;SA 適合分子量在 3Kd-150Kd 的蛋白質(zhì)分析。 規(guī)格及成分 成份
500 次包裝
(CAT#:111004-500)
MS 溶解液 50 mL
基質(zhì)液成份一 50 mg(干粉)
基質(zhì)液成份二 10 mL
使用手冊(cè) 1 份
運(yùn)輸及保存 常溫運(yùn)輸和保存,有效期一年。 自備試劑 MilliQ 水(可選)
使用方法 一:樣品準(zhǔn)備
1、 將蛋白樣品真空凍干后加入 MS 溶解液 100 uL,溶解半小時(shí)(期間
可以按下步配制基質(zhì)液)。蛋白質(zhì)的終濃度zui在 1-10 pmol/uL 之間。
如果是 Reverse-Phase-HPLC 制備的樣品,則可以不加 MS 溶解液
而直接使用。注意:一定要在蛋白質(zhì)樣品真空凍干前將其中的緩沖液、
鹽、去污劑和變性劑等去除,否則它們會(huì)嚴(yán)重影響蛋白質(zhì)晶體的形成,
沒有蛋白晶體的形成就不能進(jìn)行 MALDI 分析。
2、 稱量 1 mg 左右的基質(zhì)干粉到一干凈的 EP 管中,按每 mg CCA 加 100
uL 基質(zhì)液成份二的比例加入基質(zhì)液成份二,混勻后離心。注意:此是用
于結(jié)晶用的飽和溶液,可能有沉淀,故需要離心。注意:基質(zhì)液
鮮配制。本試劑盒提供 50mg,足夠配 50 次 200 uL 的基質(zhì)液。
3、 選用下面兩種上樣法之一上樣。也可以自選其他的上樣方法。
二:Dried-Droplet 法上樣
1、 將 1 uL 蛋白質(zhì)樣品與 1 uL 新配的飽和基質(zhì)液混勻。注意:可以多做幾
個(gè)不同的蛋白質(zhì)樣品和基質(zhì)液的比例,在 1:1-10:1 均可。
2、 用移液器將 1 uL 混合液點(diǎn)到 MS 儀器的樣品靶上,讓液體在室溫下?lián)]發(fā)
干凈。注意:不要有氣泡,槍頭也不要觸及靶面,也不能攪動(dòng)上樣后的
混合液,在未結(jié)晶之前不要搖晃。樣品靶必須充分清洗干凈,以免上次
試驗(yàn)的殘留樣品的干擾。
3、 如果樣品中含有非揮發(fā)性雜質(zhì),在此步可以用自備的 MilliQ 水洗滌晶體
一次。
4、 將樣品靶插入質(zhì)譜儀內(nèi),后續(xù)操作按 MALDI-TOF 儀器使用手冊(cè)進(jìn)行。
5、 同樣方法處理自備對(duì)照樣品(一般儀器廠家提供)。
三:Thin-Layer 法上樣
1、 用移液器將 1 uL 基質(zhì)液點(diǎn)到 MS 儀器的樣品靶上,在基質(zhì)液揮發(fā)前迅速
進(jìn)入下一步操作。
2、 迅速用移液器將 1 uL 樣品點(diǎn)到 MS 儀器的樣品靶上,讓液體在室溫下?lián)]
發(fā)干凈,一般需要 5 分鐘。
3、 將樣品靶插入質(zhì)譜儀內(nèi),后續(xù)操作按儀器使用手冊(cè)進(jìn)行。
4、 同樣方法處理自備對(duì)照樣品(一般儀器廠家提供)。
5、 同樣方法處理標(biāo)準(zhǔn)品(儀器廠商提供)。
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