本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中大鼠2,5 寡腺苷酸合成酶（2,5-OAS）水平。

? 本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中人鞭毛蛋白(flagellin)Elisa試劑盒的含量
? 有效期：6個月
? 保存條件：2-8℃
? 本試劑盒僅供科研使用，不得用于臨床診斷
檢測前準備工作：
1. 請?zhí)崆?0 分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫。
2. 從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶，屬于正?，F(xiàn)象；放置室溫，輕搖均勻，
待結(jié)晶*溶解后再配置洗滌液。可將20ml 濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水
稀釋配置成500ml 工作濃度的洗滌液，未用完的放回4℃
3. 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20 稀釋，即1 份20×洗滌緩沖液加19
4. 份蒸餾水。
實驗所需自備試驗器材：
1. 酶標儀（450nm）
2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
4. 蒸餾水或去離子水
人鞭毛蛋白(flagellin)Elisa試劑盒組成：
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備注：
1.（96T/48T）打開包裝后請及時檢查所有物品是否齊全。
2.標準品濃度依次為：10、5、2.5、1.25、0.625、0 ng/mL
樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20 分鐘，離心20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細
收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。
2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20 分鐘后，離心
20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再
次離心。
3. 尿液：用無菌管收集，離心20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存
過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20 分鐘左右（2000-3000
轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，
細胞濃度達到100 萬/ml 左右。通過反復(fù)凍融，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心
20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再
次離心。
5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存
備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻
漿器將標本勻漿充分。離心20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。分裝
后一份待檢測，其余冷凍備用。
6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上
進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
人鞭毛蛋白(flagellin)Elisa試劑盒注意事項：
1. 嚴格按照規(guī)定的時間和溫度進行溫育以保證準確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達到
室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
2. 洗板不正確可以導(dǎo)致不準確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程
中不要讓微孔干燥掉。
3. 消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD 值。
4. 底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍的底物液不能使用。
5. 避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果。
6. 在儲存和溫育時避免強光直接照射。
7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
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8. 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體。任何漂白成分都會破
壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。
9. 不能使用過期產(chǎn)品,不同批號組分不得混用。
10. 如果可能傳播疾病，所有的樣品都應(yīng)管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。
操作步驟：
1.標準品的加樣：設(shè)置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；。
2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣
品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品
zui終稀釋度為5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.加酶：每孔加入酶標試劑100μl，空白孔除外。
4.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育60 分鐘。
5.配液：將20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水20 倍稀釋后備用。
6.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此重
復(fù)5 次，拍干。
7.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
8.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
9.測定：以空白孔調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應(yīng)在加終
止液后15 分鐘以內(nèi)進行。
計算：
以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD
值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD 值計算出標
準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋
倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。
（此圖僅供參考）
人鞭毛蛋白(flagellin)Elisa試劑盒性能：
1. 檢測范圍：0.3125 ng/mL - 10 ng/mL
2. 批內(nèi)與批間應(yīng)分別小于9%和11%
3. 靈敏度：zui低檢測濃度小于0.1 ng/mL