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          上海雅吉生物科技有限公司>>即用型PCR檢測(cè)試劑盒>>YS310201豬藍(lán)耳美洲株P(guān)CR試劑盒

          豬藍(lán)耳美洲株P(guān)CR試劑盒

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          • 豬藍(lán)耳美洲株P(guān)CR試劑盒

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          參考價(jià) 3200
          訂貨量 1
          具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
          • 型號(hào) YS310201
          • 品牌 Sigma-Aldrich
          • 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
          • 所在地 上海市

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          更新時(shí)間:2024-11-11 16:09:06瀏覽次數(shù):358

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          產(chǎn)品簡(jiǎn)介

          供貨周期 一周 規(guī)格 50T
          貨號(hào) YS300201 主要用途 定性檢測(cè)病毒,對(duì)病毒引起的疾病診斷及療效評(píng)估有重要指導(dǎo)意義。
          豬藍(lán)耳美洲株P(guān)CR試劑盒,本試劑盒利用實(shí)時(shí)熒光PCR原理,定性檢測(cè)病毒,對(duì)病毒引起的疾病診斷及療效評(píng)估有重要指導(dǎo)意義。

          詳細(xì)介紹

          歡迎新老客戶咨詢索取改產(chǎn)品詳細(xì)說明書及規(guī)格價(jià)格

          【產(chǎn)品名稱】

          通用名稱:豬藍(lán)耳美洲株P(guān)CR試劑盒

          英文名稱:s Detection Kit (Real-Time PCR Method)

          【包裝規(guī)格】 50T/盒

          【預(yù)期用途】

          本試劑盒利用實(shí)時(shí)熒光PCR原理,定性檢測(cè)病毒,對(duì)病毒引起的疾病診斷及療效評(píng)估有重要指導(dǎo)意義。

          【檢驗(yàn)原理】

          本試劑盒針對(duì)病毒的高度保守區(qū)域設(shè)計(jì)特異性引物和探針,在反應(yīng)體系中含病毒基因組模板的情況下,PCR反應(yīng)得以進(jìn)行并釋放熒光信號(hào)。利用熒光定量PCR儀對(duì)PCR過程中相應(yīng)通道信號(hào)進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)和輸出,實(shí)現(xiàn)檢測(cè)結(jié)果的定性分析。

          【主要組成成份】豬藍(lán)耳美洲株P(guān)CR試劑盒

          序號(hào)

          組成

          25T/盒

          50T/盒

          1

          RT-PCR反應(yīng)液

          375 μL×1管

          750 μL×1管

          2

            逆轉(zhuǎn)錄酶

           50 μL×1管

          100 μL×1管

          3

             Taq酶

           75 μL×1管

          150 μL×1管

          4

            陽性對(duì)照

           40 μL×1管

           40 μL×1管

          5

            陰性對(duì)照

           40 μL×1管

           40 μL×1管

          6

          說明書

          1份

          1份

          注:陰性對(duì)照為基因組DNA,陽性對(duì)照為失去活性的病毒cDNA。

          【儲(chǔ)存條件及有效期】避光-20℃以下保存,避免反復(fù)凍融,有效期12個(gè)月。

          【適用儀器】ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀。

          【樣本要求】

          1. 適用標(biāo)本類型:發(fā)病動(dòng)物血液、空腸及小腸腸內(nèi)容物及組織臟器(腸道組織、腸系膜及淋巴結(jié)等)和病毒培養(yǎng)液。

          2. 標(biāo)本采集,方法如下:

          (1) 血清:用一次性注射器取靜脈血2-3ml,轉(zhuǎn)至5ml 的干燥管中,密閉送檢。

          (2) 腸內(nèi)容物:無菌條件下取腸道內(nèi)容物約1g 左右,置入1ml 含有1.0ml PBS(或生理鹽水)的5ml 離心管中,立即送檢。

          (3) 組織臟器:取發(fā)病動(dòng)物腸道組織及腸系膜淋巴結(jié)等組織約1g,置一1.5ml的潔凈離心管中,密閉送檢。

          3.應(yīng)避免標(biāo)本間交叉污染。

          4.標(biāo)本收集后可立即檢測(cè);若不能立即檢測(cè),可置于2~8℃冷藏過夜保存;如需長期保存,標(biāo)本應(yīng)凍存于-80℃以下,避免反復(fù)凍融。

          【檢驗(yàn)方法】豬藍(lán)耳美洲株P(guān)CR試劑盒

          1. 試劑準(zhǔn)備(試劑準(zhǔn)備區(qū))

          (1)從冰箱中取出試劑盒, 從試劑盒中取出實(shí)驗(yàn)所需試劑,充分融化混勻并瞬時(shí)離心以去除管壁附著液體。

          (2)核算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需要的反應(yīng)數(shù)(n),并根據(jù)如下表所示反應(yīng)體系計(jì)算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需要的各種試劑量。

          n =陰性對(duì)照數(shù)(1T)+陽性對(duì)照數(shù)(1T)+誤差預(yù)留量(1T)+樣本數(shù)

          單反液配制表(每份)

          RT-PCR反應(yīng)液

          15.0 μL

          逆轉(zhuǎn)錄酶

           2.0 μL

          Taq酶

           3.0 μL

           (3)在無菌離心管中加入上述試劑,充分混勻后瞬時(shí)離心。按照20 μL/管分裝量將試劑分裝至PCR反應(yīng)管。

          2.樣本準(zhǔn)備(樣本處理區(qū))

          用QIAGEN、Roche公司RNA提取試劑盒提取RNA,具體操作按照其試劑盒說明書操作。

          3.加樣

          在上述制備好的PCR反應(yīng)樣本管中分別加入處理好的待測(cè)標(biāo)本RNA各5 μl、終體積25 μl/管,蓋好PCR反應(yīng)蓋混勻后瞬時(shí)低速離心,轉(zhuǎn)移到PCR儀器上。陰性對(duì)照和陽性對(duì)照管則各加5 μL試劑盒自帶的陰性對(duì)照或陽性對(duì)照品,終體積為25 μl/管,蓋好PCR反應(yīng)蓋混勻后瞬時(shí)低速離心,轉(zhuǎn)移到PCR儀器上。

          4. PCR(PCR擴(kuò)增區(qū))

          (1)取樣本處理區(qū)準(zhǔn)備好的PCR反應(yīng)管,放置在實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀樣品槽相應(yīng)位置,并記錄放置順序。

          (2)按下表設(shè)置儀器核酸擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)進(jìn)行PCR擴(kuò)增。

          豬藍(lán)耳美洲株P(guān)CR試劑盒

           

          反應(yīng)體積

          25 μL

          通道選擇

          FAM通道采集病毒熒光信號(hào)

          PCR

          反應(yīng)

          條件

          步驟

          條件

          循環(huán)數(shù)

          反轉(zhuǎn)錄

           42℃:10分鐘(min)

          1

          預(yù)變性

          95℃:3分鐘(min)

          1

          預(yù)擴(kuò)增

          95℃:5秒(s)

          5

          55℃:40秒(s)

          PCR擴(kuò)增

          95℃:5秒(s)

          40

          55℃:40秒(s)

          (此階段結(jié)束時(shí)采集熒光信號(hào))

          注:ABI系列熒光PCR儀在設(shè)置時(shí)不選ROX校正,設(shè)置淬滅基團(tuán)選擇None。

          【參考值(參考范圍)】

          1.試劑盒有效性判定:

          (1)陽性對(duì)照:有典型S型擴(kuò)增曲線或Ct值≤35。

          (2)陰性對(duì)照:Ct值>38或無Ct值,線形為直線或輕微斜線,無指數(shù)增長期。

          2.標(biāo)本結(jié)果判定:

          (1)陽性:標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值≤35或有明顯指數(shù)增長期。

          (2)可疑:標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值在35~38范圍內(nèi)。此時(shí)應(yīng)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行重復(fù)檢測(cè),如重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果Ct值仍在35~38范圍內(nèi),有明顯指數(shù)增長期,則判定為陽性,否則為陰性。

          (3)陰性:標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值>38或無Ct值。

          【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

          通道及檢測(cè)結(jié)果

          標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果解釋

          FAM

          陽性(+)

          標(biāo)本中檢出病毒RNA

          陰性(-)

          標(biāo)本中未檢出病毒RNA

          【檢驗(yàn)方法的局限性】

          1. 當(dāng)檢測(cè)樣本中被檢核酸濃度低于本試劑盒的低檢出*可能會(huì)發(fā)生假陰性的結(jié)果。

          2. 被檢樣本在采集、運(yùn)輸、儲(chǔ)存以及處理過程中操作方式不當(dāng)容易造成RNA降解而產(chǎn)生假陰性結(jié)果。

          3. 樣本在采集、運(yùn)輸、儲(chǔ)存以及處理過程中發(fā)生交叉污染,則容易得到假陽性結(jié)果。

          【產(chǎn)品性能指標(biāo)】 產(chǎn)品的低檢出限為102 Copies/mL,產(chǎn)品CV值≤5%。

          【注意事項(xiàng)】

          1. 整個(gè)檢測(cè)過程應(yīng)嚴(yán)格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作,各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器、耗材應(yīng)獨(dú)立使用,不能混用;實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭;樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜,樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作;三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。

          2. 為避免RNA降解,樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作,且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測(cè);樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。

          3. 每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對(duì)照。

          4. 試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻,并應(yīng)瞬時(shí)離心。

          5. 試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對(duì)照在*次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū),并單獨(dú)存放。

          6. 為防止熒光干擾,應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管,并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。

          7. 儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置;不同批號(hào)試劑不能混用。

          8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正,淬滅基因選擇None。

          9. 實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無害化處理后方可丟棄。

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