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酶免疫技術(shù)在檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中得到廣泛應(yīng)用并不斷得到更新
閱讀:630 發(fā)布時間:2019-4-4目前,免疫學(xué)檢驗(yàn)中的標(biāo)記技術(shù)主要包括酶免疫技術(shù)、熒光免疫技術(shù)、放射免疫技術(shù)、金免疫技術(shù)、化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)等。其中酶免疫技術(shù)是以酶標(biāo)記的抗體(抗原)作為主要試劑,將抗原抗體反應(yīng)的特異性和酶催化底物反應(yīng)的性和專一性結(jié)合起來的一種免疫檢測技術(shù)。作為經(jīng)典的三大標(biāo)記技術(shù)之一,酶免疫技術(shù)在檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中得到廣泛應(yīng)用并不斷得到更新。
一、常用的酶及顯色底物
在酶免疫技術(shù)中用于標(biāo)記的酶應(yīng)具有催化活性高、催化專一性強(qiáng);與抗原抗體偶聯(lián)后不影響抗原抗體的免疫反應(yīng)性和酶活性;催化的底物易于配制、保存且催化底物產(chǎn)生的信號產(chǎn)物易于觀察和檢測;對人無害且價廉、易得等特點(diǎn),目前常用的酶及底物見表1。
表1 常用酶及底物
常用酶 底物 加終止液前顏色 加終止液后顏色
辣根過氧化物酶(HRP) 鄰苯二胺(OPD) 橙黃色 棕黃色
RZ>3.1 四甲基聯(lián)苯胺(TMB) 藍(lán)色 黃色
堿性磷酸酶(AP) 對硝基苯磷酸酯(p-NPP) 黃色 黃色
二、標(biāo)記物的制備
在酶免疫技術(shù)中制備標(biāo)記物的抗原應(yīng)純度高、抗原性完整;制備標(biāo)記物的抗體應(yīng)特異性好、效價高、親和力強(qiáng)、比活性高、能批量和易于分離純化。
制備酶標(biāo)記物的方法應(yīng)符合簡單、產(chǎn)量高;避免酶、抗體(抗原)、酶標(biāo)記物各自形成聚合物;標(biāo)記反應(yīng)不影響酶的活性和抗原抗體的免疫反應(yīng)性等原則。標(biāo)記物制備的方法基本屬于兩類:
(一) 交聯(lián)法
交聯(lián)法是以一可同時與酶和抗體(抗原)結(jié)合的 交聯(lián)劑作為“橋”,分別連接酶與抗體(抗原)的方法,此類方法中目前zui常用的是戊二醛交聯(lián)法,形成的結(jié)合物為:酶-戊二醛-抗體(抗原)
(二) 直接法
直接法是用一活化劑首先將酶活化,被活化的酶分子上的基團(tuán)直接可與抗體(抗原)結(jié)合形成標(biāo)記物,如過碘酸鈉法。形成的結(jié)合物為:酶-抗體(抗原)。
三、酶免疫技術(shù)類型
酶免疫技術(shù)按照抗原抗體系統(tǒng)是定位于組織細(xì)胞上還是存在于液體樣品中分為酶免疫組化技術(shù)和酶免疫測定(EIA),酶免疫測定又可分為均相酶免疫測定和異相酶免疫測定。