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          技術(shù)文章

          犬賴脯胰島素elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)操作步驟

          閱讀:621          發(fā)布時(shí)間:2020-3-4

          犬賴脯胰島素(L-INS)elisa試劑盒操作步驟:

          1.  標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋: 本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支, 用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

          100IU/L  5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品  150μl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

          50IU/L  4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品  150μl 的 5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

          25IU/L  3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品  150μl 的 4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

          12.5IU/L  2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品  150μl 的 3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

          6.25IU/L  1 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品  150μl 的 2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

          2.  加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同) 、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。 在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50μl, 待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測(cè)樣品 10μl(樣品zui終稀釋度為 5 倍) 。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。

          3.  溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

          4.  配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

          5.  洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此

          重復(fù) 5 次,拍干。

          6.  加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl,空白孔除外。

          7.  溫育:操作同 3。

          8.  洗滌:操作同 5。

          9.  顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色

          15 分鐘.

          10. 終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色) 。

          11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值) 。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

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