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桔青霉探針法熒光定量PCR檢測試劑盒使用方法
閱讀:242 發(fā)布時間:2021-5-13桔青霉探針法熒光定量PCR檢測試劑盒使用方法:
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細菌樣品DNA。注意:DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA,后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備O157:H7標準曲線(以10-10E6這6個10倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DN段作為陽性對照。
1. 標記6個離心管,分別為6,5,4,3,2和1號。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至10E7拷貝/μL,建議每次稀釋10倍,梯度稀釋至10E7拷貝/μL)。
4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得10E6拷貝/μL的陽性對照。
5. 換槍頭,從6號管中取5 μL溶液到5號管中,充分震蕩1分鐘,得10E5拷貝/μL的陽性對照。
6. 換槍頭,從5號管中取5 μL溶液到4號管中,重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。
7. NC管中不加任何陽性對照。
8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進行定量PCR(見下步),每個樣品做3次重復。PCR后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標準曲線。
小鼠熱休克因子1(HSF1)ELISA試劑盒
小鼠熱休克蛋白糖蛋白96(HSP gp96)ELISA試劑盒
小鼠熱休克蛋白90(HSP-90)ELISA試劑盒
小鼠熱休克蛋白70(HSP-70)ELISA試劑盒
小鼠熱休克蛋白60(Hsp-60)ELISA試劑盒
小鼠熱休克蛋白40(Hsp-40)ELISA試劑盒
小鼠熱休克蛋白27(HSP-27)ELISA試劑盒
小鼠熱休克蛋白20(Hsp-20)ELISA試劑盒
小鼠缺血修飾白蛋白(IMA)ELISA試劑盒
小鼠醛固酮(ALD)ELISA試劑盒
小鼠全段甲狀旁腺素(i-PTH)ELISA試劑盒
小鼠去甲腎上腺素(NE)ELISA試劑盒
小鼠去甲腎上腺素(NA)ELISA試劑盒
小鼠趨化因子配體1(CCL1)ELISA試劑盒
小鼠趨化因子5(CCL5/RANTES)ELISA試劑盒
小鼠趨化因子(fractalkine/CX3CL1)ELISA試劑盒
小鼠趨化因子(FK)ELISA試劑盒
小鼠趨化因子(CC基序)配體2(MRC2)ELISA試劑盒