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封閉毛細(xì)線蟲(chóng)探針?lè)晒舛縋CR試劑盒使用方法：

一、稀釋PCR陽(yáng)性對(duì)照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例）

1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽(yáng)性對(duì)照。

2. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為7，6，5，4，3，2。

3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專(zhuān)用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。

4. 在7號(hào)管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。

5. 換槍頭，在6號(hào)管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。

6. 換槍頭，在5號(hào)管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照到5號(hào)管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。

7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。

二、樣品DNA的制備

8. 如果有N個(gè)樣品，必須設(shè)置N+2個(gè)提取，多出的一個(gè)是PC（樣品制備陽(yáng)性對(duì)照），一個(gè)是NC（樣品制備陰性對(duì)照）?？梢杂?0μL上步制備的PCR陽(yáng)性對(duì)照的第4號(hào)（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于1萬(wàn)拷貝）或第5號(hào)（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于10萬(wàn)拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。

9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。

三、設(shè)置qPCR反應(yīng)（20 μL體系，在樣品制備室進(jìn)行）

10. 如果只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照，6個(gè)用于PCR陽(yáng)性對(duì)照。如果做2-3次重復(fù)，則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。

11. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照，并且陽(yáng)性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后加）

膜粘連蛋白6抗體

錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白42抗體

胞環(huán)蛋白肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白抗體

腺病毒5結(jié)合蛋白BS69抗體(骨形態(tài)發(fā)生蛋白受體相關(guān)分子1)

載脂蛋白A1抗體

自噬相關(guān)蛋白16A抗體

磷酸化自噬相關(guān)蛋白4D抗體

磷酸化自噬相關(guān)蛋白4C抗體

磷酸化自噬相關(guān)蛋白7抗體

磷酸化自噬相關(guān)蛋白16A抗體

磷酸化自噬相關(guān)蛋白9A抗體

磷酸化自噬相關(guān)蛋白4D抗體

磷酸化自噬相關(guān)蛋白4D抗體

磷酸化腫瘤血管內(nèi)皮標(biāo)志物8抗體

磷酸化自噬相關(guān)蛋白4A抗體

磷酸化自噬相關(guān)蛋白4C抗體

磷酸化自噬相關(guān)蛋白16A抗體

磷酸化蛋白激酶AKT3抗體

磷酸化腎上腺素能受體β2抗體

磷酸化水通道蛋白2抗體

磷酸化自噬相關(guān)蛋白3抗體

醛縮酶2抗體

胰腺α淀粉酶抗體

錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白11抗體

磷酸化非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體

磷酸化活化復(fù)制因子2抗體

醛固酮還原酶家族1成員D1抗體

肝血管生成素相關(guān)蛋白抗體

自水解酶結(jié)構(gòu)域5蛋白抗體

溶血磷脂酸酰基轉(zhuǎn)移酶β抗體

AFP4b蛋白抗體