菌種的培養(yǎng):
1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長(zhǎng)基質(zhì)組成的繁殖材料。菌種分為母種(一級(jí)種)、原種(二級(jí)種)和栽培種(三級(jí)種)三級(jí)。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種,其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復(fù)篩。
2、挑選具有某種能力的有用菌種,也稱(chēng)種子制備,是指菌種在一定條件下,經(jīng)過(guò)擴(kuò)大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質(zhì)量的純菌種的制備過(guò)程。以作接入發(fā)酵罐中進(jìn)一步擴(kuò)大菌體量及合成產(chǎn)物之用。
3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備 菌種制備。
4、保存在沙土管或冷凍管中的菌種,用無(wú)菌手續(xù)挑取少許,接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上,在25℃(或較高溫度)下培養(yǎng)5~7天(或較長(zhǎng)時(shí)間。所得孢子還需進(jìn)一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子(對(duì)于霉菌類(lèi)孢子制備,多數(shù)采用大米、小米之類(lèi)的天然培養(yǎng)基)。
5、將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液,接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上,于25~28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在上延續(xù)使用半年左右。
6、如果有些菌種不產(chǎn)孢子,如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的,則可采用搖瓶液體培養(yǎng)制得菌絲體,作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長(zhǎng)、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應(yīng)是易于被菌體利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米漿),及無(wú)機(jī)鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐的種子應(yīng)生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯,無(wú)雜菌及異常菌體。接種量一般在10%~20%。
公司專(zhuān)業(yè)代理ATCC菌種,*,質(zhì)量保證,為大中型科研提供嚴(yán)格質(zhì)量體系控制的ATCC,CMCC,CICC,DSMZ標(biāo)準(zhǔn)菌株。
培養(yǎng)條件:
1、營(yíng)養(yǎng)肉汁瓊脂:牛肉膏 3.0g,蛋白胨 10.0g,NaCl 5.0g,瓊脂 15.0g,蒸餾水 1.0L,pH7.0。[注] 培養(yǎng)芽孢桿菌時(shí)加入5mg MnSO4·H2O,則有利于產(chǎn)生芽孢。pH7.0。121℃,15min。
2、需氧類(lèi)型:好氧
3、培養(yǎng)溫度:55℃
保存方法:
傳代保存法:培養(yǎng)基的濃度不宜過(guò)高,營(yíng)養(yǎng)成分不宜過(guò)于豐富,尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于最適生長(zhǎng)溫度為好。若為產(chǎn)酸菌種,則應(yīng)在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣 [3] 。
液體石蠟覆蓋保存法:該法較前一種方法保存菌種的時(shí)間更長(zhǎng),適用于霉菌、酵母菌、放線(xiàn)菌及需氧細(xì)菌等的保存。
懸液保存法:
① 蒸餾水保存法:適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線(xiàn)菌,將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應(yīng)注意避免水分的蒸發(fā)。
② 糖液保存法:適用于酵母菌,如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗處保存,可長(zhǎng)達(dá)10年。除此之外,也可使用緩沖液或食鹽水等進(jìn)行保存。
載體保存法:①土壤保存法;②砂土保存法;③硅膠保存法;④磁珠保存法;⑤麩皮保存法;⑥紙片(濾紙)保存法。
常用的冷凍保存法:
① 低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃):低溫冷凍保存時(shí)使用螺旋口試管較為方便,也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時(shí)菌液加量不宜過(guò)多,有些可添加保護(hù)劑。此外,也可用φ5mm的玻璃珠來(lái)吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器內(nèi),再放入低溫冰箱內(nèi)進(jìn)行保存的。
② 干冰保存法(-70℃左右):即將菌種管插入干冰內(nèi),再置于冰箱內(nèi)進(jìn)行冷凍保存。
③ 液氮保存法(-196℃):是適用范圍*的微生物保存法。
注意事項(xiàng):
1、菌種常規(guī)培養(yǎng)時(shí)間:細(xì)菌1-2天,酵母3天,霉菌5-7天,大型真菌7-10天。
2、試管斜面種請(qǐng)盡快轉(zhuǎn)接,不建議長(zhǎng)期存放。
3、初次使用時(shí)請(qǐng)按照本說(shuō)明書(shū)推薦條件進(jìn)行復(fù)活培養(yǎng),如使用其它類(lèi)型培養(yǎng)基或培養(yǎng)條件造成菌種不活等損失,BNCC不負(fù)責(zé)任。
4、使用者應(yīng)保證菌種的安全儲(chǔ)存和操作,帶菌廢棄物應(yīng)高壓滅菌處理后丟棄。
馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA) 英文名稱(chēng):Potato Dextrose Agar 產(chǎn)品規(guī)格:250g
馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基 英文名稱(chēng):Potato Agar Medium 產(chǎn)品規(guī)格:250g
馬鈴薯葡萄糖 英文名稱(chēng):Potato Dextrose Water 產(chǎn)品規(guī)格:250g
綜合馬鈴薯培養(yǎng)基 英文名稱(chēng):Intergrated Potato Medium 產(chǎn)品規(guī)格:250g
麥芽汁培養(yǎng)基 英文名稱(chēng):Malt Extract Medium 產(chǎn)品規(guī)格:250g
YPD液體培養(yǎng)基 英文名稱(chēng):YPD Broth 產(chǎn)品規(guī)格:250g
酵母浸出物葡萄糖土瓊脂培養(yǎng)基 英文名稱(chēng):Yeast Extract Glucose Oxytetracycline Agar 產(chǎn)品規(guī)格:250g
馬鈴薯葡萄糖半固體瓊脂 英文名稱(chēng):Potato Dextrose Semisolid Agar 產(chǎn)品規(guī)格:250g
沙氏葡萄糖瓊脂(USP) 英文名稱(chēng):Sabouraud Dextrose Agar Medium 產(chǎn)品規(guī)格:250g
酪蛋白葡萄糖瓊脂 英文名稱(chēng):Sabouraud Dextrose Agar 產(chǎn)品規(guī)格:250g
凸圓靈芝(白芝)規(guī)格磷;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書(shū) CAS 規(guī)格: 0.1g 訂購(gòu)|咨詢(xún)
敵草快;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書(shū) CAS 6385-62-2 規(guī)格: 0.1g 訂購(gòu)|咨詢(xún)
嗪草;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書(shū) CAS 21087-64-9 規(guī)格: 0.1g 訂購(gòu)|咨詢(xún)
惡霜靈;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書(shū) CAS 77732-09-3 規(guī)格: 0.1g 訂購(gòu)|咨詢(xún)
丙嘧草酯;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書(shū) CAS 134605-64-4 規(guī)格: 0.1g 訂購(gòu)|咨詢(xún)
;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書(shū) CAS 80844-07-1 規(guī)格: 0.1g 訂購(gòu)|咨詢(xún)
解草唑;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書(shū) CAS 99607-70-2 規(guī)格: 0.1g 訂購(gòu)|咨詢(xún)
成分度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì);有證書(shū) CAS 52645-53-1 規(guī)格: 0.25g 訂購(gòu)|咨詢(xún)
L-焦-對(duì)照品;有報(bào)告 CAS 98-79-3 規(guī)格: 100mg 訂購(gòu)|咨詢(xún)
低聚-蔗果五糖;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證 CAS 59432-60-9 規(guī)格: 20mg 訂購(gòu)|咨詢(xún)
(M);純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書(shū) CAS 59-30-3 規(guī)格: 0.25g 訂購(gòu)|咨詢(xún)
1-氧-乙酰旋覆花 CAS 681457-46-5 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購(gòu)|咨詢(xún)
伯利亞遠(yuǎn)志糖A5 CAS 107912-97-0 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購(gòu)|咨詢(xún)
黃楊堿 CAS 4236-73-1 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購(gòu)|咨詢(xún)