蛋白表達(dá)及純化:
1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細(xì)胞,然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中,通過瞬時表達(dá)產(chǎn)生目標(biāo)蛋白。
2.收集含有目標(biāo)蛋白的部分(細(xì)胞或培養(yǎng)上清)。
3.通過親和,離子交換,疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達(dá)的重組蛋白。
4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量。
5.通過Western-blot驗證目標(biāo)蛋白正確性。
產(chǎn)品名稱:CD26分子(CD26)活性蛋白
英文名稱:Active Cluster Of Differentiation 26 (CD26)
CD26; ADA; DPPIV; DPP-IV; DPP4; ADABP; ADCP2; TP103; Adenosine Deaminase Complexing Protein 2; T-cell activation antigen CD26; Dipeptidyl Peptidase IV
信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 酶與激酶 細(xì)胞凋亡 腫瘤免疫 內(nèi)分泌學(xué) 心腦血管
物種:Homo sapiens (Human,人) 緩沖液成份:20mM Tris, 150mM NaCl緩沖液(pH8.0, 含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300) 性狀:凍干粉 純度:> 90% 等電點:6.4 性狀:凍干粉 純度:> 90% 等電點:6.4 應(yīng)用:Cell culture; Activity Assays. 規(guī)格10μg 50μg 200μg 1mg 5mg |
相關(guān)產(chǎn)品:
N-cadherin N-鈣粘附分子抗原 0.5mgN-cadherin N-鈣粘附分子抗原
APLP1 Protein Human 重組人 APLP1 / Amyloid-like protein 1 蛋白 (His 標(biāo)簽)
PDCD1重組狗 PD1 / PDCD1 / CD279 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein
IL17RB Protein Mouse 重組小鼠 IL17BR / IL17RB / IL-17 Receptor B 蛋白 (His 標(biāo)簽)
NT5E重組人 CD73 / NT5E
樣品要求:
1、待標(biāo)記樣品需保證90%以上的純度,樣品中不含有干擾標(biāo)記物結(jié)合的成分,如有特殊成分,請?zhí)崆皹?biāo)注說明。
2、待標(biāo)記樣品最小標(biāo)記量為1mg,最好是干粉,如果是液體,濃度應(yīng)大于1mg/ml。
3、抗體IgG樣品中應(yīng)不含BSA、疊氮鈉成分。
4、大分子蛋白應(yīng)提供分子量、等電點、緩沖液成分及pH等信息;小分子多肽需提供氨基酸序列;小分子化合物還需提供分子結(jié)構(gòu)式。
5、請?zhí)崆罢f明任何特殊情況。
特性
重組蛋白分為凍干粉和溶液態(tài)兩種保存形式,原核細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白為凍干粉狀態(tài),真核細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白為溶液態(tài)保存,這樣使得重組蛋白非常穩(wěn)定,在-80℃條件下可保存數(shù)年。凍干粉在使用前需進(jìn)行溶解,其中溶解的方法非常關(guān)鍵,因為溶解不好會降低蛋白的效用。溶液態(tài)保存的重組蛋白在凍融稀釋使用過程中也需要仔細(xì)注意,這些都是用戶在實際應(yīng)用中經(jīng)常遇到的問題。
(1)原核細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白。Immune tech大腸桿菌表達(dá)的凍干重組蛋白,已經(jīng)從包涵體中提純,添加了蛋白保護(hù)劑,使用過濾后的無菌水作為復(fù)溶劑即可,復(fù)溶凍干蛋白100 μg,用86 μl的超純水,輕輕搖晃使蛋白溶解,再用移液槍的槍頭輕吹幾下即可溶解,一定不能使用渦旋儀進(jìn)行快速振蕩或劇烈搖晃。
(2)真核細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白。有活性的蛋白質(zhì)不僅要轉(zhuǎn)錄和翻譯,還要進(jìn)行翻譯后的加工,使得蛋白質(zhì)的空間折疊方式維持正常,所以重組蛋白必須在真核細(xì)胞中進(jìn)行,如哺乳動物細(xì)胞能夠識別和去除基因中的內(nèi)含子,對翻譯后的蛋白質(zhì)進(jìn)行加工,這樣表達(dá)的蛋白質(zhì)具有生物活性。我們用溶液態(tài)來保存,保持了其良好的活性和穩(wěn)定性。
(3)類固醇5α還原酶1(SRD5α1)重組蛋白的保護(hù)劑。在凍干和儲存過程中常用的保護(hù)劑或穩(wěn)定劑有糖類,多元醇,聚合物,表面活性劑,某些蛋白和氨基酸等。我們通常加8%(質(zhì)量比體積)的海藻糖作為凍干保護(hù)劑。海藻糖可明顯阻止蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)改變以及凍干過程中蛋白質(zhì)的伸展和聚集,也是一種普遍應(yīng)用的凍干保護(hù)劑和填充劑。
操作步驟:
Ⅰ 實體組織蛋白的提取
1. 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑, 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF,混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。
2. 每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中,剪碎成3mm×3mm左右的小塊,加入0.5~1 mL冷 Lysis Buffer,玻璃勻漿器上下手動勻漿15次,注意低溫操作;
3. 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管,離心10000轉(zhuǎn)/分,4℃離心5 min;
4. 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中,即為全蛋白提取物,蛋白定量(Bradford法、BCA法);
5. 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。
Ⅱ 培養(yǎng)細(xì)胞蛋白提取
1. 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞,吸去培養(yǎng)基后,加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次,每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液;
2. 懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞或用細(xì)胞刮子刮下的貼壁細(xì)胞,將細(xì)胞及培養(yǎng)液移至離心管中, 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min,再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS,1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次;
3. 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑, 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF,混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。
4. 細(xì)胞洗滌后,轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中,加入上述配制好的冷Lysis Buffer,加入量如下表所示:
細(xì)胞數(shù)量 | Lysis Buffer加入量 |
107個 | 0.5 mL~1 mL |
5×106個 | 0.2 mL~0.5 mL |
5.置于4℃搖床平臺上,溫和振蕩15 min;
6. 14,000rpm,4℃離心15min,取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量(Bradford法、BCA法);
7. 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融
公司產(chǎn)品僅供科研使用,不得用于臨床!
馬毛癬菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Trichophyton equinumPCR 50T
馬秋博病毒PCR檢測試劑盒 英文名稱; Machupo Virus(MACV)RTPCR 50T
馬胃葡萄球菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Staphylococcus equorumPCR 50T
曼那角病毒PCR檢測試劑盒 英文名稱; Menangle virusRTPCR 50T
MIP-2 人巨噬細(xì)胞炎性蛋白-2Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-SLAMF6 SLAMF6抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh NLRP9 富含亮重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白9抗體 規(guī)格 0.2ml
Human replication protein A,RPA-70 ELISA Kit 人復(fù)制蛋白A 96T
TRAK1 英文名稱: 驅(qū)動蛋白結(jié)合蛋白1抗體 0.2ml
CSTF3 英文名稱: 細(xì)胞分化促進(jìn)因子77抗體 0.1ml
Anti-SLAMF6 SLAMF6抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
CD26分子(CD26)活性蛋白桿狀巴爾通體PCR檢測試劑盒 英文名稱; Bartonella bacilliformisPCR
肝胰腺細(xì)小病毒PCR檢測試劑盒 英文名稱; Hepatopancreatic Parvovirus(HPV)PCR
肝胰腺壞死性細(xì)菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Necrotizing Hepatopancreatitis BacteriumPCR
肝片吸蟲PCR檢測試劑盒 英文名稱; Fasciola hepaticaPCR