公司產(chǎn)品僅供科研使用,不得用于臨床!
產(chǎn)品名稱:泛醌蛋白2(UBQLN2)重組蛋白
英文名稱:Recombinant Ubiquilin 2 (UBQLN2)
CHAP1; CHAP1/DSK2; Dsk2; LIC-2; N4BP4; PLIC-2; PLIC2; NEDD4 Binding Protein 4; Protein linking IAP with cytoskeleton 2; Ubiquitin-like product Chap1/Dsk2
酶與激酶
物種:Homo sapiens (Human,人) 來源:原核表達 宿主E.coli 內(nèi)毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法測定) 亞細胞定位::細胞核, 細胞質(zhì) 預測分子量:14.0kDa 實際分子量:14kDa(差異分析請參閱說明書) 片段與標簽:Ile33~Ala126 with N-terminal His Tag 緩沖液成份:20mM Tris, 150mM NaCl緩沖液(pH8.0, 含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300) 性狀:凍干粉 純度:> 95% 等電點:9.4 應用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB. 規(guī)格10μg 50μg 200μg 1mg 5mg |
樣品要求:
1、待標記樣品需保證90%以上的純度,樣品中不含有干擾標記物結(jié)合的成分,如有特殊成分,請?zhí)崆皹俗⒄f明。
2、待標記樣品最小標記量為1mg,最好是干粉,如果是液體,濃度應大于1mg/ml。
3、抗體IgG樣品中應不含BSA、疊氮鈉成分。
4、大分子蛋白應提供分子量、等電點、緩沖液成分及pH等信息;小分子多肽需提供氨基酸序列;小分子化合物還需提供分子結(jié)構(gòu)式。
5、請?zhí)崆罢f明任何特殊情況。
相關(guān)產(chǎn)品:
饑餓素-O-乙?;D(zhuǎn)移酶(GOAT)重組蛋白 Recombinant Ghrelin-O-Acyltransferase (GOAT)
AIM2 Protein Human 重組人 AIM2 蛋白 (GST 標簽)
OPCML重組小鼠 OBCAM / OPCML 蛋白 (His 標簽) Protein
CX3CL1 Protein Canine 重組狗 Fractalkine / CX3CL1 蛋白
IL12A & IL27B重組人 IL12A & IL27B Heterodimer 蛋白 Protein
蛋白表達及純化:
1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細胞,然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細胞中,通過瞬時表達產(chǎn)生目標蛋白。
2.收集含有目標蛋白的部分(細胞或培養(yǎng)上清)。
3.通過親和,離子交換,疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。
4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量。
5.通過Western-blot驗證目標蛋白正確性。
特性
重組蛋白分為凍干粉和溶液態(tài)兩種保存形式,原核細胞表達的重組蛋白為凍干粉狀態(tài),真核細胞表達的重組蛋白為溶液態(tài)保存,這樣使得重組蛋白非常穩(wěn)定,在-80℃條件下可保存數(shù)年。凍干粉在使用前需進行溶解,其中溶解的方法非常關(guān)鍵,因為溶解不好會降低蛋白的效用。溶液態(tài)保存的重組蛋白在凍融稀釋使用過程中也需要仔細注意,這些都是用戶在實際應用中經(jīng)常遇到的問題。
(1)原核細胞表達的重組蛋白。Immune tech大腸桿菌表達的凍干重組蛋白,已經(jīng)從包涵體中提純,添加了蛋白保護劑,使用過濾后的無菌水作為復溶劑即可,復溶凍干蛋白100 μg,用86 μl的超純水,輕輕搖晃使蛋白溶解,再用移液槍的槍頭輕吹幾下即可溶解,一定不能使用渦旋儀進行快速振蕩或劇烈搖晃。
(2)真核細胞表達的重組蛋白。有活性的蛋白質(zhì)不僅要轉(zhuǎn)錄和翻譯,還要進行翻譯后的加工,使得蛋白質(zhì)的空間折疊方式維持正常,所以重組蛋白必須在真核細胞中進行,如哺乳動物細胞能夠識別和去除基因中的內(nèi)含子,對翻譯后的蛋白質(zhì)進行加工,這樣表達的蛋白質(zhì)具有生物活性。我們用溶液態(tài)來保存,保持了其良好的活性和穩(wěn)定性。
(3)類固醇5α還原酶1(SRD5α1)重組蛋白的保護劑。在凍干和儲存過程中常用的保護劑或穩(wěn)定劑有糖類,多元醇,聚合物,表面活性劑,某些蛋白和氨基酸等。我們通常加8%(質(zhì)量比體積)的海藻糖作為凍干保護劑。海藻糖可明顯阻止蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)改變以及凍干過程中蛋白質(zhì)的伸展和聚集,也是一種普遍應用的凍干保護劑和填充劑。
破傷風梭狀芽孢桿菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Clostridium tetaniPCR 50T
皮欽德病毒PCR檢測試劑盒 英文名稱; Pichinde virus(PARV)RTPCR 50T
皰疹病毒PCR檢測試劑盒 英文名稱; B Virus(BV)BPCR 50T
諾氏梭狀芽孢桿菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Clostridium novyiPCR 50T
Neurocan 神經(jīng)粘蛋白抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
Anti-ATH III Ⅲ抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-AXL (Tyr698+Tyr702+Tyr703) 0酸化粘附相關(guān)抗體 規(guī)格 0.1ml
山羊抗大鼠 IgG(H+L)/Biotin 0.1ml 美國Jackson公司分裝
VAT1 英文名稱: 嗜鉻顆粒胺轉(zhuǎn)運蛋白VAT1抗體 0.1ml
DAP12 英文名稱: 自然殺傷激活受體相關(guān)蛋白DAP12抗體 0.1ml
Anti-ATH III Ⅲ抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
泛醌蛋白2(UBQLN2)重組蛋白羅斯河病毒PCR檢測試劑盒 英文名稱; Ross River Virus(RRV)RTPCR
羅氏沼蝦諾達病毒PCR檢測試劑盒 英文名稱; Macrobrachium Rosenbergii Nodavirus(MrNV)RTPCR
羅布羅布芽生菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Loboa lobaiPCR
輪狀病毒通用PCR檢測試劑盒 英文名稱; Rotavirus RTPCR
操作步驟:
Ⅰ 實體組織蛋白的提取
1. 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑, 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF,混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。
2. 每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中,剪碎成3mm×3mm左右的小塊,加入0.5~1 mL冷 Lysis Buffer,玻璃勻漿器上下手動勻漿15次,注意低溫操作;
3. 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預冷的離心管,離心10000轉(zhuǎn)/分,4℃離心5 min;
4. 取上清轉(zhuǎn)移至新的預冷的離心管中,即為全蛋白提取物,蛋白定量(Bradford法、BCA法);
5. 分裝保存于-70℃,避免反復凍融。
Ⅱ 培養(yǎng)細胞蛋白提取
1. 貼壁培養(yǎng)的細胞,吸去培養(yǎng)基后,加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次,每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液;
2. 懸浮培養(yǎng)的細胞或用細胞刮子刮下的貼壁細胞,將細胞及培養(yǎng)液移至離心管中, 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min,再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS,1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次;
3. 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑, 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF,混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。
4. 細胞洗滌后,轉(zhuǎn)至新的預冷的離心管中,加入上述配制好的冷Lysis Buffer,加入量如下表所示:
細胞數(shù)量 | Lysis Buffer加入量 |
107個 | 0.5 mL~1 mL |
5×106個 | 0.2 mL~0.5 mL |
5.置于4℃搖床平臺上,溫和振蕩15 min;
6. 14,000rpm,4℃離心15min,取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量(Bradford法、BCA法);
7. 分裝保存于-70℃,避免反復凍融