標(biāo)簽選擇:
親和標(biāo)簽:蛋白重組表達(dá)過(guò)程中采用親和標(biāo)簽融合表達(dá)有兩方面的作用:一方面是為了使蛋白純化過(guò)程變得更加容易;另一方面是為了促進(jìn)某些不溶性蛋白可溶。蛋白標(biāo)簽可分兩類(lèi):一類(lèi)是短肽類(lèi)標(biāo)簽;一類(lèi)是長(zhǎng)肽以融合蛋白(fused partner)形式共表達(dá)。使用不同的蛋白標(biāo)簽需要根據(jù)具體案例來(lái)分析。
不同的系統(tǒng)步驟稍微有些不同的,大致步驟如下:
真核表達(dá)系統(tǒng)的重組蛋白表達(dá)步驟:
a. 選擇表達(dá)載體和宿主細(xì)胞(常用的CHO和HEK293)
b. 表達(dá)載體的構(gòu)建
c. 無(wú)內(nèi)毒素的質(zhì)粒抽提
d. 細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染
e. 表達(dá)小試,條件優(yōu)化
f. 表達(dá)分析和鑒定(SDS-PGAE和WB)
g. 大量表達(dá)
h. 親和純化
i. 檢測(cè)和鑒定
僅供科研實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱(chēng) | 物種 | 性狀 | 來(lái)源 |
脂肪酸去飽和酶2(FADS2)重組蛋白 | Homo sapiens (Human,人) | 凍干粉 | 原核表達(dá) |
英文名稱(chēng):Recombinant Fatty Acid Desaturase 2 (FADS2)
LLCDL2; FADSD6; D6D; TU13; DES6; Delta-6-Desaturase; Delta(6) fatty acid desaturase
酶與激酶
物種:Homo sapiens (Human,人)
來(lái)源:原核表達(dá)
宿主E.coli
內(nèi)毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法測(cè)定)
亞細(xì)胞定位::分泌
預(yù)測(cè)分子量:18.5kDa
實(shí)際分子量:19kDa(差異分析請(qǐng)參閱說(shuō)明書(shū))
片段與標(biāo)簽:Met1~His130 with N-terminal His Tag
緩沖液成份:20mM Tris, 150mM NaCl緩沖液(pH8.0, 含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300)
性狀:凍干粉
純度:> 95%
等電點(diǎn):6.3
應(yīng)用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.
規(guī)格10μg 50μg 200μg 1mg 5mg
相關(guān)產(chǎn)品:
血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子D(VEGFD)重組蛋白 Recombinant Vascular Endothelial Growth Factor D (VEGFD)
ADAM12 Protein Human 重組人 ADAM12 蛋白 (His 標(biāo)簽)
CSF3重組人 G-CSF / CSF3 蛋白 (isoform b) Protein
GP140 Protein HIV 重組人類(lèi)免疫缺陷病毒Ⅰ型 HIV-1 gp140 蛋白 (group P, strain RBF168) (Fc 標(biāo)簽)
HA重組甲型流感 H
原核表達(dá)系統(tǒng)的重組蛋白表達(dá)步驟:
a. 選擇表達(dá)載體
b. 密碼子優(yōu)化
c. 基因合成/亞克隆
d. 轉(zhuǎn)化表達(dá)菌株
e. 蛋白表達(dá)小試分析
f. 如果蛋白可溶,蛋白親和純化
g. 如果蛋白不可溶,則需要變復(fù)性來(lái)制備可溶蛋白。
h. 鑒定,包括SDS-PAGE和WB鑒定
GZMH蛋白;表達(dá)蛋白的分析、純化、檢測(cè)
誘導(dǎo)表達(dá)成功后,表達(dá)蛋白的分析、純化、檢測(cè)應(yīng)該順當(dāng),按一般的實(shí)驗(yàn)步驟做沒(méi)太大的問(wèn)題。
操作步驟 :
根據(jù)使用量,取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF,使 PMSF 的zui終濃度為 1mM。混勻備用(PMSF 現(xiàn)用現(xiàn)加)。
1、樣品前處理:
a)對(duì)于貼壁細(xì)胞:去除培養(yǎng)液,用 PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液洗一遍。按照 6 孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細(xì)胞充分接觸。
b)對(duì)于懸浮細(xì)胞:離心收集細(xì)胞,用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液,再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒(méi)有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多,必需分裝成 50-100 萬(wàn)細(xì)胞/管,然后再裂解。
c)對(duì)于組織樣品: 切成細(xì)小的碎片。按照每 20mg 組織加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當(dāng)減少裂解液的用量)。用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。
2、后處理:
將裂解后的樣品 10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進(jìn)行后續(xù)的蛋白濃度測(cè)定、SDS-PAGE、Western blotting 和免疫沉淀等操作。
衣氏放線菌PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱(chēng); Actinomyces israeliiPCR 50T
幼蟲(chóng)芽孢桿菌PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱(chēng); Paenibacillus larvaePCR 50T
支原體通用PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱(chēng); Mycoplasma spp.PCR 50T
豬布魯氏桿菌PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱(chēng); Brucella suisPCR 50T
Notch1/MOTC(Neurogenic locus notch homolog protein 1) 跨膜受體蛋白Notch-1抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
Anti-AQP3 水通道蛋白-3抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh phospho-ATG4D(Ser467) 0酸化自噬相關(guān)蛋白4D抗體 規(guī)格 0.1ml
山羊抗人 IgG(H+L)/HRP 0.1ml 美國(guó)Jackson公司分裝
VGLL1 英文名稱(chēng): 轉(zhuǎn)錄輔助因子退變樣蛋白1抗體 0.2ml
DENND2C 英文名稱(chēng): MAP激活死亡域蛋白2C抗體 0.2ml
Anti-AQP3 水通道蛋白-3抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
脂肪酸去飽和酶2(FADS2)重組蛋白南非諾卡菌PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱(chēng); Nocardia transvalensisPCR
耐久腸球菌PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱(chēng); Enterococcus duransPCR
奈瑟菌通用PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱(chēng); Neisseria spp.PCR
納氏蟲(chóng)屬通用·PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱(chēng); Naegleria spp.·PCR
注意事項(xiàng):
1、不同細(xì)胞或組織樣品所需的固定時(shí)間有所不同,應(yīng)當(dāng)根據(jù)細(xì)胞或組織的種類(lèi)以及組織塊的大小來(lái)調(diào)整固定時(shí)間。
2、雖然作用溫和,但能硬化組織,固定時(shí)間過(guò)久會(huì)導(dǎo)致組織變脆,切片時(shí)易碎。因此固定時(shí)間通常不宜超過(guò) 24 小時(shí)。
3、醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基,使抗原決定簇的三維構(gòu)象出現(xiàn)空間障礙。分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或 掩蓋某些抗原決定簇,使之不能充分暴露,可造成假陰性的染色,影響免疫組化結(jié)果。因此,4%固定的細(xì)胞或組織樣品在進(jìn)行免疫組化檢測(cè)時(shí),有時(shí)需要對(duì)抗原先進(jìn)行修復(fù),然后才能進(jìn)行免疫染色等后續(xù)操作。
4、本產(chǎn)品對(duì)人體有害,操作時(shí)請(qǐng)小心,并注意有效防護(hù)以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。
5、為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作