脯氨酰4-羥化酶α多肽Ⅲ(P4Ha3)重組蛋白公司正在銷(xiāo)售的產(chǎn)品：DDR2重組食蟹猴 DDR2 Kinase / CD167b 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein
Klf4 (Kruppel likefactor 4 0.5mgKlf4 (Kruppel likefactor 4) 腸道內(nèi)富含的Kruppel樣因子抗原
BID重組人 BID 蛋白 Protein
ACBD7 Protein Hu

樣品要求：

1、待標(biāo)記樣品需保證90%以上的純度，樣品中不含有干擾標(biāo)記物結(jié)合的成分，如有特殊成分，請(qǐng)?zhí)崆皹?biāo)注說(shuō)明。

2、待標(biāo)記樣品最小標(biāo)記量為1mg，最好是干粉，如果是液體，濃度應(yīng)大于1mg/ml。

3、抗體IgG樣品中應(yīng)不含BSA、疊氮鈉成分。

4、大分子蛋白應(yīng)提供分子量、等電點(diǎn)、緩沖液成分及pH等信息；小分子多肽需提供氨基酸序列；小分子化合物還需提供分子結(jié)構(gòu)式。

5、請(qǐng)?zhí)崆罢f(shuō)明任何特殊情況。
公司產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床！

產(chǎn)品名稱(chēng)：脯氨酰4-羥化酶α多肽Ⅲ(P4Ha3)重組蛋白

 英文名稱(chēng)：Recombinant Prolyl-4-Hydroxylase Alpha Polypeptide III (P4Ha3)

Procollagen-Proline,2-Oxoglutarate 4-Dioxygenase(Proline 4-Hydroxylase),Alpha Polypeptide III

酶與激酶

 

相關(guān)產(chǎn)品：

Klf4 (Kruppel likefactor 4 0.5mgKlf4 (Kruppel likefactor 4) 腸道內(nèi)富含的Kruppel樣因子抗原

ACBD7 Protein Human 重組人 ACBD7 蛋白 (His 標(biāo)簽)

DDR2重組食蟹猴 DDR2 Kinase / CD167b 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

PILRB Protein Mouse 重組小鼠 PILRB1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

BID重組人 BID 蛋白 Protein

特性

重組蛋白分為凍干粉和溶液態(tài)兩種保存形式,原核細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白為凍干粉狀態(tài),真核細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白為溶液態(tài)保存,這樣使得重組蛋白非常穩(wěn)定,在-80℃條件下可保存數(shù)年。凍干粉在使用前需進(jìn)行溶解,其中溶解的方法非常關(guān)鍵,因?yàn)槿芙獠缓脮?huì)降低蛋白的效用。溶液態(tài)保存的重組蛋白在凍融稀釋使用過(guò)程中也需要仔細(xì)注意,這些都是用戶(hù)在實(shí)際應(yīng)用中經(jīng)常遇到的問(wèn)題。

(1)原核細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白。Immune tech大腸桿菌表達(dá)的凍干重組蛋白,已經(jīng)從包涵體中提純,添加了蛋白保護(hù)劑,使用過(guò)濾后的無(wú)菌水作為復(fù)溶劑即可,復(fù)溶凍干蛋白100 μg,用86 μl的超純水,輕輕搖晃使蛋白溶解,再用移液槍的槍頭輕吹幾下即可溶解,一定不能使用渦旋儀進(jìn)行快速振蕩或劇烈搖晃。

(2)真核細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白。有活性的蛋白質(zhì)不僅要轉(zhuǎn)錄和翻譯,還要進(jìn)行翻譯后的加工,使得蛋白質(zhì)的空間折疊方式維持正常,所以重組蛋白必須在真核細(xì)胞中進(jìn)行,如哺乳動(dòng)物細(xì)胞能夠識(shí)別和去除基因中的內(nèi)含子,對(duì)翻譯后的蛋白質(zhì)進(jìn)行加工,這樣表達(dá)的蛋白質(zhì)具有生物活性。我們用溶液態(tài)來(lái)保存,保持了其良好的活性和穩(wěn)定性。

(3)類(lèi)固醇5α還原酶1(SRD5α1)重組蛋白的保護(hù)劑。在凍干和儲(chǔ)存過(guò)程中常用的保護(hù)劑或穩(wěn)定劑有糖類(lèi),多元醇,聚合物,表面活性劑,某些蛋白和氨基酸等。我們通常加8%(質(zhì)量比體積)的海藻糖作為凍干保護(hù)劑。海藻糖可明顯阻止蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)改變以及凍干過(guò)程中蛋白質(zhì)的伸展和聚集,也是一種普遍應(yīng)用的凍干保護(hù)劑和填充劑。

操作步驟：

Ⅰ 實(shí)體組織蛋白的提取

1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

2．  每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小塊，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃勻漿器上下手動(dòng)勻漿15次，注意低溫操作；

3． 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管，離心10000轉(zhuǎn)/分，4℃離心5 min；

4． 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中，即為全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

5． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

Ⅱ 培養(yǎng)細(xì)胞蛋白提取

1． 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞，吸去培養(yǎng)基后，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液；

2． 懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞或用細(xì)胞刮子刮下的貼壁細(xì)胞，將細(xì)胞及培養(yǎng)液移至離心管中， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次；

3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

4． 細(xì)胞洗滌后，轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：

5．置于4℃搖床平臺(tái)上，溫和振蕩15 min；

6． 14,000rpm，4℃離心15min，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

7． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融

牛支原體PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱(chēng); Mycoplasma bovisPCR 50T

皮炎芽生菌PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱(chēng); Blastomyces dermatitidisPCR 50T

腔闊盤(pán)吸蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱(chēng); Eurytrema coelomaticumPCR 50T

禽皰疹病毒通用PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱(chēng); Gallid HerpesvirusPCR

NT-4 人神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)素-4Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-Phospho-Cyclin D1 (Thr286) 0酸化cyclin D1抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh NF-M/Neurofilament M 中分子量神經(jīng)絲蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml

Human soluble protein 185,sp185/HER-2 ELISA Kit 人可溶性蛋白185 96T

T7 tag 英文名稱(chēng)： T7 tag標(biāo)簽抗體 0.1ml

CD99L2 英文名稱(chēng)： CD99樣蛋白2抗體 0.1ml

Anti-Phospho-Cyclin D1 (Thr286) 0酸化cyclin D1抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

脯氨酰4-羥化酶α多肽Ⅲ(P4Ha3)重組蛋白諾氏瘧原蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱(chēng); Plasmodium knowlesiPCR

諾如病毒型PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱(chēng); Norwalk Viruses G1 (NV1)G1RTPCR

諾如病毒通用PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱(chēng); Norwalk Viruses(NV)RTPCR

諾卡菌通用PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱(chēng); Nocardia spp.PCR

蛋白表達(dá)及純化：

1.培養(yǎng)500ml哺乳動(dòng)物細(xì)胞，然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中，通過(guò)瞬時(shí)表達(dá)產(chǎn)生目標(biāo)蛋白。

2.收集含有目標(biāo)蛋白的部分（細(xì)胞或培養(yǎng)上清）。

3.通過(guò)親和，離子交換，疏水及凝膠過(guò)濾等多種層析方法純化表達(dá)的重組蛋白。

4.通過(guò)SDS-PAGE電泳檢測(cè)每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量。

5.通過(guò)Western-blot驗(yàn)證目標(biāo)蛋白正確性。