核糖核酸酶A8(RNASE8)重組蛋白公司正在銷售的產(chǎn)品：甲硫氨酰tRNA合成酶(MARS)重組蛋白 物種； Homo sapiens (Human，人) 來源； 原核表達 性狀：凍干粉 黑色素瘤關(guān)聯(lián)ME20(ME20M)重組蛋白 物種； Homo sapiens (Human，人) 來源； 原核表達 性狀：凍干粉 腺苷酸環(huán)化酶1(ADCY1)重組蛋白 物種； Mus musculus (Mous

蛋白表達及純化：

1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細胞，然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細胞中，通過瞬時表達產(chǎn)生目標(biāo)蛋白。

2.收集含有目標(biāo)蛋白的部分（細胞或培養(yǎng)上清）。

3.通過親和，離子交換，疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。

4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量。

5.通過Western-blot驗證目標(biāo)蛋白正確性。

產(chǎn)品名稱：核糖核酸酶A8(RNASE8)重組蛋白

 英文名稱：Recombinant Ribonuclease A8 (RNASE8)

Rnase-A8; Ribonuclease,RNase A Family,8

酶與激酶

 

相關(guān)產(chǎn)品：

周期素依賴性激酶2(CDK2)重組蛋白 物種； Mus musculus (Mouse，小鼠) 來源； 原核表達 性狀：凍干粉 支鏈轉(zhuǎn)氨酶2(BCAT2)重組蛋白 物種； Homo sapiens (Human，人) 來源； 原核表達 性狀：凍干粉 腺苷酸環(huán)化酶2(ADCY2)重組蛋白 物種； Homo sapiens (Human，人) 來源； 原核表達 性狀：凍干粉

樣品要求：

1、待標(biāo)記樣品需保證90%以上的純度，樣品中不含有干擾標(biāo)記物結(jié)合的成分，如有特殊成分，請?zhí)崆皹?biāo)注說明。

2、待標(biāo)記樣品最小標(biāo)記量為1mg，最好是干粉，如果是液體，濃度應(yīng)大于1mg/ml。

3、抗體IgG樣品中應(yīng)不含BSA、疊氮鈉成分。

4、大分子蛋白應(yīng)提供分子量、等電點、緩沖液成分及pH等信息；小分子多肽需提供氨基酸序列；小分子化合物還需提供分子結(jié)構(gòu)式。

5、請?zhí)崆罢f明任何特殊情況。

特性

重組蛋白分為凍干粉和溶液態(tài)兩種保存形式,原核細胞表達的重組蛋白為凍干粉狀態(tài),真核細胞表達的重組蛋白為溶液態(tài)保存,這樣使得重組蛋白非常穩(wěn)定,在-80℃條件下可保存數(shù)年。凍干粉在使用前需進行溶解,其中溶解的方法非常關(guān)鍵,因為溶解不好會降低蛋白的效用。溶液態(tài)保存的重組蛋白在凍融稀釋使用過程中也需要仔細注意,這些都是用戶在實際應(yīng)用中經(jīng)常遇到的問題。

(1)原核細胞表達的重組蛋白。Immune tech大腸桿菌表達的凍干重組蛋白,已經(jīng)從包涵體中提純,添加了蛋白保護劑,使用過濾后的無菌水作為復(fù)溶劑即可,復(fù)溶凍干蛋白100 μg,用86 μl的超純水,輕輕搖晃使蛋白溶解,再用移液槍的槍頭輕吹幾下即可溶解,一定不能使用渦旋儀進行快速振蕩或劇烈搖晃。

(2)真核細胞表達的重組蛋白。有活性的蛋白質(zhì)不僅要轉(zhuǎn)錄和翻譯,還要進行翻譯后的加工,使得蛋白質(zhì)的空間折疊方式維持正常,所以重組蛋白必須在真核細胞中進行,如哺乳動物細胞能夠識別和去除基因中的內(nèi)含子,對翻譯后的蛋白質(zhì)進行加工,這樣表達的蛋白質(zhì)具有生物活性。我們用溶液態(tài)來保存,保持了其良好的活性和穩(wěn)定性。

(3)類固醇5α還原酶1(SRD5α1)重組蛋白的保護劑。在凍干和儲存過程中常用的保護劑或穩(wěn)定劑有糖類,多元醇,聚合物,表面活性劑,某些蛋白和氨基酸等。我們通常加8%(質(zhì)量比體積)的海藻糖作為凍干保護劑。海藻糖可明顯阻止蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)改變以及凍干過程中蛋白質(zhì)的伸展和聚集,也是一種普遍應(yīng)用的凍干保護劑和填充劑。

操作步驟：

Ⅰ 實體組織蛋白的提取

1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

2．  每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小塊，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃勻漿器上下手動勻漿15次，注意低溫操作；

3． 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管，離心10000轉(zhuǎn)/分，4℃離心5 min；

4． 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中，即為全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

5． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

Ⅱ 培養(yǎng)細胞蛋白提取

1． 貼壁培養(yǎng)的細胞，吸去培養(yǎng)基后，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液；

2． 懸浮培養(yǎng)的細胞或用細胞刮子刮下的貼壁細胞，將細胞及培養(yǎng)液移至離心管中， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次；

3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

4． 細胞洗滌后，轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：

5．置于4℃搖床平臺上，溫和振蕩15 min；

6． 14,000rpm，4℃離心15min，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

7． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融

公司產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床！

潰瘍分枝桿菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Mycobacterium ulceransPCR 50T

里氏埃里希氏體PCR檢測試劑盒 英文名稱; Ehrlichia risticiiPCR 50T

淋病奈瑟菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Neisseria gonorrhoeaePCR 50T

通用PCR檢測試劑盒 英文名稱; Borrelia spp.PCR 50T

ORX-A(orexin-A) 增食欲素-A/欲激素A抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

Anti-Phospho-beta-Arrestin 1(Ser412) 0酸化β抑制蛋白1抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-ASK1(Ser1033) 0酸化細胞凋亡信號調(diào)節(jié)1抗體 規(guī)格 0.1ml

Tubulin-alpha 濃縮液 0.1ml 進口分裝

UGP2 英文名稱： 尿苷酰二0酸葡萄糖焦0化酶2抗體 0.2ml

DNAJC7 英文名稱： DNAJC7蛋白抗體 0.2ml

Anti-Phospho-beta-Arrestin 1(Ser412) 0酸化β抑制蛋白1抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

核糖核酸酶A8(RNASE8)重組蛋白青蟹雙順反子病毒PCR檢測試劑盒 英文名稱; Mud Crab Dicistrovirus (MCDV)PCR

青霉通用PCR檢測試劑盒 英文名稱; Penicillium spp.PCR

禽致病性大腸桿菌血清型PCR檢測試劑盒 英文名稱; Avian Pathogenicity Escherichia coli(APEC) O1PCR

禽正呼腸孤病毒PCR檢測試劑盒 英文名稱; Avian OrthoreovirusRTPCR