使用方法
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 陽(yáng)性對(duì)照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場(chǎng)上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個(gè)樣品，則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取，多出的一個(gè)用作樣品制備陽(yáng)性對(duì)照管、另一個(gè)用作樣品制備陰性對(duì)照管。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板），6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板），1 個(gè)用于PCR 陽(yáng)性對(duì)照。

特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

儲(chǔ)存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

定量PCR方法：

相關(guān)產(chǎn)品：
馬鼻疽桿菌PCR檢測(cè)試劑盒

葡萄糖苷曼氏桿菌PCR檢測(cè)試劑盒

肉芽腫性曼氏桿菌病PCR檢測(cè)試劑盒

溶血性曼氏桿菌PCR檢測(cè)試劑盒
PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無(wú)色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見(jiàn)的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度
Goat Anti-human IgG/FITC FITC標(biāo)記的羊抗人IgG 0.3ml

FRG2B： FRG2B蛋白抗體 0.2ml

DNA甲基轉(zhuǎn)移酶-3α抗體 Anti-Dnmt3a 0.1ml

Anti-PDE4D/FITC 熒光素標(biāo)記0酸二酯酶4D抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-TRADD(Ser269) 0酸化壞死因子受體1相關(guān)死亡域蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml

Rabbit Anti-Dog IgG/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗狗IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.3ml
小鼠腫瘤壞死因子受體超家族成員5(TNFRSF5)ELISA試劑盒 ，英文名： TNFRSF5 ELISA Kit

犬γ氨基(GABA)ELISA檢測(cè)試劑盒CanineGamma-aminobyricacid,GABAELISAKit 96T/48T

犬雙氫睪酮(DHT)免疫試劑盒 Canine Dihydrotestosterone,DHT ELISA Kit

英文名稱(chēng)HumanLPSELISAKit人脂多糖(LPS)規(guī)格：96T/48T

超氧化物歧化酶(SOD)組織裂解樣品制備試劑盒50次

Ratheatshockprotein20,hSP-20ELISA試劑盒大鼠熱休克蛋白20(HSP-20)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
禽腎炎病毒型PCR檢測(cè)試劑盒2-Aminothiazol-4-acetic acid  中文名：2-氨基噻唑-4-乙酸  分子式：C5H6N2O2S  度：98.0%  小鼠β葡糖苷酶(β-glucosidase)ELISA試劑盒   96T/48T  

Ampicillin Trihydrate  三水酸  分子式：C16H19N3O4S  度：98.0%  小鼠β酚(β-naphthol)LISA試劑盒   96T/48T           

2-Acetylfluorene  中文名：2-乙酰芴  分子式：C15H12O  度：98.0%  小鼠β內(nèi)啡肽受體(β-EPR)ELISA試劑盒   96T/48T  

1-Allyl-3,5-Dimethylpyrazole  中文名：1-烯丙基-3,5-二吡唑  分子式：C8H12N2  度：98.0%  小鼠β內(nèi)啡肽(β-EP)ELISA試劑盒   96T/48T  

(1R,2S)-2-Amino-1,2-diphenylethanol  中文名：(1R,2S)-2-氨基-1,2-二苯基乙醇  分子式：C14H15NO  度：99.0%  小鼠β甘露糖苷酶(βManase)ELISA試劑盒   96T/48T