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          S-期激酶關(guān)聯(lián)蛋白1(SKP1)重組蛋白

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          更新時間:2023-03-30 16:29:37瀏覽次數(shù):335

          聯(lián)系我們時請說明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息,謝謝!

          產(chǎn)品簡介

          供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 詳見說明書
          應(yīng)用領(lǐng)域 化工 主要用途 科研
          英文名稱 Recombinant S-Phase Kinase Associated Protein 物種 Homo sapiens (Human,人)
          來源 原核表達(dá) 應(yīng)用 Cell culture; Activity Assa
          S-期激酶關(guān)聯(lián)蛋白1(SKP1)重組蛋白公司正在銷售的產(chǎn)品:半胱氨酰tRNA合成酶(CARS)重組蛋白 物種; Mus musculus (Mouse,小鼠) 來源; 原核表達(dá) 性狀:凍干粉 絲氨酰tRNA合成酶2(SARS2)重組蛋白 物種; Homo sapiens (Human,人) 來源; 原核表達(dá) 性狀:凍干粉 全羧酶合成酶(HLCS)重組蛋白 物種; Homo sapiens (Hum

          詳細(xì)介紹

          樣品要求:

          1、待標(biāo)記樣品需保證90%以上的純度,樣品中不含有干擾標(biāo)記物結(jié)合的成分,如有特殊成分,請?zhí)崆皹?biāo)注說明。

          2、待標(biāo)記樣品最小標(biāo)記量為1mg,最好是干粉,如果是液體,濃度應(yīng)大于1mg/ml。

          3、抗體IgG樣品中應(yīng)不含BSA、疊氮鈉成分。

          4、大分子蛋白應(yīng)提供分子量、等電點(diǎn)、緩沖液成分及pH等信息;小分子多肽需提供氨基酸序列;小分子化合物還需提供分子結(jié)構(gòu)式。

          5、請?zhí)崆罢f明任何特殊情況。
          公司產(chǎn)品僅供科研使用,不得用于臨床!

          產(chǎn)品名稱:S-期激酶關(guān)聯(lián)蛋白1(SKP1)重組蛋白

           英文名稱:Recombinant S-Phase Kinase Associated Protein 1 (SKP1)

          SKP1A; EMC19; OCP-II; OCP2; TCEB1L; p19A; Cyclin-A/CDK2-associated p19; RNA polymerase II elongation factor-like protein; Transcription elongation factor B polypeptide 1-like

          酶與激酶

          物種:Homo   sapiens (Human,人)

          來源:原核表達(dá)

          宿主E.coli

          內(nèi)毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法測定)

          亞細(xì)胞定位::細(xì)胞質(zhì)

          預(yù)測分子量:22.4KDa

          實(shí)際分子量:26kDa(差異分析請參閱說明書)

          片段與標(biāo)簽:Met1~Lys163   with N-terminal His Tag

          緩沖液成份:100mM   NaHCO3, 500mM NaCl緩沖液(pH8.3,含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% TrehaloseProclin300

          性狀:凍干粉

          純度:>   95%

          等電點(diǎn):4.4

          應(yīng)用:Positive   Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.

          規(guī)格10μg 50μg 200μg 1mg   5mg

           

          相關(guān)產(chǎn)品:

          醛固酮合酶(ALDOS)重組蛋白 物種; Homo sapiens (Human,人) 來源; 原核表達(dá) 性狀:凍干粉

          前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草溶菌素6(PCSK6)重組蛋白 物種; Homo sapiens (Human,人) 來源; 原核表達(dá) 性狀:凍干粉

          RNA特異性腺苷脫氨酶(ADAR)重組蛋白 物種; Homo sapiens (Human,人) 來源; 原核表達(dá) 性狀:凍干粉

          特性

          重組蛋白分為凍干粉和溶液態(tài)兩種保存形式,原核細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白為凍干粉狀態(tài),真核細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白為溶液態(tài)保存,這樣使得重組蛋白非常穩(wěn)定,-80條件下可保存數(shù)年。凍干粉在使用前需進(jìn)行溶解,其中溶解的方法非常關(guān)鍵,因?yàn)槿芙獠缓脮档偷鞍椎男в?。溶液態(tài)保存的重組蛋白在凍融稀釋使用過程中也需要仔細(xì)注意,這些都是用戶在實(shí)際應(yīng)用中經(jīng)常遇到的問題。

          (1)原核細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白。Immune tech大腸桿菌表達(dá)的凍干重組蛋白,已經(jīng)從包涵體中提純,添加了蛋白保護(hù)劑,使用過濾后的無菌水作為復(fù)溶劑即可,復(fù)溶凍干蛋白100 μg,86 μl的超純水,輕輕搖晃使蛋白溶解,再用移液槍的槍頭輕吹幾下即可溶解,一定不能使用渦旋儀進(jìn)行快速振蕩或劇烈搖晃。

          (2)真核細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白。有活性的蛋白質(zhì)不僅要轉(zhuǎn)錄和翻譯,還要進(jìn)行翻譯后的加工,使得蛋白質(zhì)的空間折疊方式維持正常,所以重組蛋白必須在真核細(xì)胞中進(jìn)行,如哺乳動物細(xì)胞能夠識別和去除基因中的內(nèi)含子,對翻譯后的蛋白質(zhì)進(jìn)行加工,這樣表達(dá)的蛋白質(zhì)具有生物活性。我們用溶液態(tài)來保存,保持了其良好的活性和穩(wěn)定性。

          (3)類固醇還原酶1(SRD5α1)重組蛋白的保護(hù)劑。在凍干和儲存過程中常用的保護(hù)劑或穩(wěn)定劑有糖類,多元醇,聚合物,表面活性劑,某些蛋白和氨基酸等。我們通常加8%(質(zhì)量比體積)的海藻糖作為凍干保護(hù)劑。海藻糖可明顯阻止蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)改變以及凍干過程中蛋白質(zhì)的伸展和聚集,也是一種普遍應(yīng)用的凍干保護(hù)劑和填充劑。

          操作步驟:

          實(shí)體組織蛋白的提取

          1. 在每1mL Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑, 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF,混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

          2  100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中,剪碎成3mm×3mm左右的小塊,加入0.51 mL Lysis Buffer,玻璃勻漿器上下手動勻漿15次,注意低溫操作;

          3. 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管,離心10000轉(zhuǎn)/分,4離心5 min;

          4. 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中,即為全蛋白提取物,蛋白定量(Bradford法、BCA法);

          5. 分裝保存于-70,避免反復(fù)凍融。

          培養(yǎng)細(xì)胞蛋白提取

          1. 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞,吸去培養(yǎng)基后,加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次,每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液;

          2. 懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞或用細(xì)胞刮子刮下的貼壁細(xì)胞,將細(xì)胞及培養(yǎng)液移至離心管中, 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min,再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS,1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次;

          3. 在每 1mL Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑, 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF,混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

          4. 細(xì)胞洗滌后,轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中,加入上述配制好的冷Lysis Buffer,加入量如下表所示:

          細(xì)胞數(shù)量

          Lysis Buffer加入量

          107

          0.5 mL1 mL

          5×106

          0.2 mL0.5 mL

          5.置于4搖床平臺上,溫和振蕩15 min;

          6 14,000rpm,4離心15min,取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量(Bradford法、BCA法);

          7. 分裝保存于-70,避免反復(fù)凍融

          通用PCR檢測試劑盒 規(guī)格 50T 英文; Borrelia spp.PCR

          淋病奈瑟菌PCR檢測試劑盒 規(guī)格 50T 英文; Neisseria gonorrhoeaePCR

          里氏埃里希氏體PCR檢測試劑盒 規(guī)格 50T 英文; Ehrlichia risticiiPCR

          潰瘍分枝桿菌PCR檢測試劑盒 規(guī)格 50T 英文; Mycobacterium ulceransPCR

          大鼠二(MDA)ELISA試劑盒 ,英文名: MDA ELISA Kit

          Mouse ierferon alpha (IFN- alpha) ELISA Kit 小鼠α干擾素(IFN-α)ELISA試劑盒

          ELISA 小鼠內(nèi)皮細(xì)胞合酶(mouse eNOS) 48T/96T 進(jìn)口分裝

          CLIAKitforKLHELISAKit小鼠鑰孔蟲戚血藍(lán)蛋白規(guī)格:48T/96T

          通用型大腸彎曲桿菌(Campylobactercoli)試劑盒20

          ELISAKitTGFβ2大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β2規(guī)格:48T/96T

          S-期激酶關(guān)聯(lián)蛋白1(SKP1)重組蛋白犬惡絲蟲PCR檢測試劑盒 英文名稱; Dirofilaria immitisPCR

          犬副流感病毒PCR檢測試劑盒 英文名稱; Canine Parainfluenza Virus(CPIV)RTPCR

          犬冠狀病毒PCR檢測試劑盒 英文名稱; Canine Corona Virus(CCoV)RTPCR

          犬巨球菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Macrococcus canisPCR

          蛋白表達(dá)及純化:

          1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細(xì)胞,然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中,通過瞬時表達(dá)產(chǎn)生目標(biāo)蛋白。

          2.收集含有目標(biāo)蛋白的部分(細(xì)胞或培養(yǎng)上清)。

          3.通過親和,離子交換,疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達(dá)的重組蛋白。

          4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量。

          5.通過Western-blot驗(yàn)證目標(biāo)蛋白正確性。


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