PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱:魚源性成分(Fish)核酸檢測試劑盒
規(guī)格:50T
分類:PCR檢測試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)送貨上門。
相關(guān)產(chǎn)品:
呂氏泰勒蟲PCR檢測試劑盒 英文名稱; Theileria lowenshuniPCR
綠膿假單胞菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Pseudomonas aeruginosaPCR
麻風(fēng)分枝桿菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Mycobacterium lepraePCR
馬巴貝斯蟲PCR檢測試劑盒 英文名稱; Babesia equiPCR
實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備 | 二、操作步驟 |
1. DNA模板 2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允?span>DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 | 1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl)???1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 |
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
小鼠神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白3(G3)ELISA試劑盒 ,英文名: G3 ELISA Kit
小鼠可溶性壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(sAIL)ELISA檢測試劑盒Mousesolubletumornecrosisfactor-relatedapoptosisinducingligand,sAILELISAKIT 96T/48T
人肝素輔因子Ⅱ(HCⅡ)免疫試劑盒 Human HCⅡ ELISA Kit
RatHya]uronatebindingprotein,HABPELISAKit大鼠透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白(HABP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
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MouseIerleukin4,IL-4ELISA試劑盒小鼠白介素4(IL-4)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Anti-PDK1/PDPK1/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠30酸肌醇依賴性蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Streptavidin/FITC 熒光素標(biāo)記鏈霉親和素Multi-class antibodies規(guī)格: 0.3ml
表皮生長因子受體-8抗體 Anti-EGFR-ⅤⅢ 0.2ml
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Rhesus antibody Rh phospho-TCF3/E2A/E47(Ser39) 0酸化轉(zhuǎn)錄因子3抗體 規(guī)格 0.1ml
Streptavidin/FITC 熒光素標(biāo)記鏈霉親和素Multi-class antibodies規(guī)格: 0.3ml
魚源性成分(Fish)核酸檢測試劑盒大鼠神經(jīng)纖維網(wǎng)蛋白1(P1)ELISA試劑盒 ,英文名: P1 ELISA Kit
Mouse cyclin D3 (Cyclin-D3) ELISA Kit 小鼠細(xì)胞周期素D3(Cyclin-D3)ELISA試劑盒
Rat25-DihydroxyvitaminD3,HVD3ELISAKit 大鼠25羥D3(25(OH)D3/25HVD3)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforHBeAg(立可讀)乙型肝炎e抗原規(guī)格:48T/96T
細(xì)胞半胱(cysteine)含量高效液相色譜法定量檢測試劑盒20次
Reatserine/threonineproteinkinase,STKELISAKit大鼠絲/蛋酸酶(STK)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍