PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱:貂源性成分(Martes)核酸檢測試劑盒
規(guī)格:50T
分類:PCR檢測試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
相關產(chǎn)品:
鄰單胞菌通用PCR檢測試劑盒 英文名稱; Pleisiomonas spp.PCR
淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎病毒PCR檢測試劑盒 英文名稱; Lymphocytic Choriomeningitis Virus(LCMV)RTPCR
淋病奈瑟菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Neisseria gonorrhoeaePCR
流產(chǎn)布魯氏菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Brucella abortusPCR
實驗過程:
一、試劑準備 | 二、操作步驟 |
1. DNA模板 2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允?span>DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 | 1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl)???1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 |
2.調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
注意事項:
①加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
小鼠腎上腺髓質(zhì)素(ADM)ELISA試劑盒 ,英文名: ADM ELISA Kit
小鼠肝細胞生長因子(HGF)ELISA檢測試劑盒Mousehepatocytegrowthfactor,HGFELISAkit 96T/48T
人肝臟甘油三脂脂肪酶(HTGL)免疫試劑盒 Human hepatic iglyceride lipase,HTGL ELISA Kit
RatHexokinase,HKELISAKit大鼠己糖(HK)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
BLOTTO10核酸雜交封閉溶液100毫升
MouseIerleukin15,IL-15ELISA試劑盒小鼠白介素15(IL-15)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Anti-PDEF/FITC 熒光素標記上皮特異性ETs轉(zhuǎn)錄因子抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-Rat IgG/FITC 熒光素標記兔抗大鼠IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.3ml
DNA甲基轉(zhuǎn)移酶-3β抗體 Anti-Dnmt3β 0.1ml
Goat Anti-human IgM/FITC FITC標記的羊抗人IgM 0.3ml
FBXO18 英文名稱: F-box蛋白家族FBXO18抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-TPH(Ser260) 0酸化色羥化酶抗體 規(guī)格 0.1ml
Rabbit Anti-Rat IgG/FITC 熒光素標記兔抗大鼠IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.3ml
貂源性成分(Martes)核酸檢測試劑盒大鼠腎損傷分子1(Kim1)ELISA試劑盒 ,英文名: Kim1 ELISA Kit
Mouse motilin (MTL) ELISA Kit 小鼠胃動素(MTL)ELISA試劑盒
RatVitaminD3,VD3ELISAKit 大鼠D3(VD3)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
CLIAKitforHBXIP(HumanhepatitisBvirusXieractingprotein)ELISAKit人乙型肝炎病毒X蛋白相互作用蛋白規(guī)格:48T/96T
細胞ZAP70活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次
swinemajorhistocompatibilitycomplexⅢ,MHCⅢ/SLAⅢELISAKit豬主要組織相容性復合體Ⅲ類(MHCⅢ/SLAⅢ)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍