詳細介紹
產(chǎn)品僅用于科研注意事項:1.基礎(chǔ)程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學;8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱 | 轉(zhuǎn)基因品系玉米MON832 PCR試劑盒 |
英文名稱 | PCR kit for transgenic maize line mon832 |
貨號 | YSP96877 |
自備物品:
15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標儀:用于微量樣品比色分析
儲存條件:
14℃或-20℃
準備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
產(chǎn)品僅用于科研不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。
細胞色素P450 4A1英文名稱:inhibitory subunit of nuclear factor-kappa B英文簡稱I-kB 檢測范圍:1620nmol/L-32ng/mL
細胞色素P450 3A4英文名稱:β2-Glycoprotein 1 antibody英文簡稱β2-GP1-Ab 檢測范圍:1645nmol/L-
細胞色素P450 2W1英文名稱:Receptor interacting Protein 英文簡稱RIP 檢測范圍:1743nmol/L-20ng/ml
細胞色素p450 2s1英文名稱:Plasminogen activator inhibitor type 1英文簡稱PAIT1 檢測范圍:1183nmol/L-20ng/ml
細胞色素P450 2R1英文名稱:respiratory syncytial virus IgG英文簡稱RSV-IgG 檢測范圍:1566nmol/L-
細胞色素P450 2D6英文名稱:epidermalgrowthfactor receptor varianttypeⅢ英文簡稱EGFRvⅢ 檢測范圍:1524nmol/L-
細胞色素P450 2C9英文名稱:platelet associated IgG英文簡稱PAIgG 檢測范圍:1523nmol/L-40ng/mL
細胞色素P450 2C19英文名稱:Glycogen phosphorylase a英文簡稱GP-a 檢測范圍:1537nmol/L-120U/L
Ferrocene 規(guī)格:>98% 細胞角蛋白4
Tranylcypromine(2-PCPA)HCl 規(guī)格:>97%,單胺氧化酶(MAO)抑制劑 補體C1qTNF9鏈多肽
Flavianicacidhydrate 規(guī)格:>96.5%,BS 5號染色體開放閱讀框34
Fuchsinacidcalciumsalt 規(guī)格:>60%,BS E1A激活基因刺激蛋白1
Gallaminetriethiodide 規(guī)格:>98%,BR 2號染色體開放閱讀框42
GlcN-2S,D-Glucosamine-2-sulfatesodiumsalt 規(guī)格:>96%,BR 中心體蛋白110
Glucose-6-phosphatedehydrogenase 規(guī)格:酶活:>200 NADP units/mg,BC 克侖特羅/瘦肉精
Glutaricacid 規(guī)格:>98%,BR 纖維素酶
Glutaricanhydride 規(guī)格:>96%,BR 3號染色體開放閱讀框54
轉(zhuǎn)基因品系玉米MON832 PCR試劑盒淀粉結(jié)合域蛋白1抗體 英文縮寫:GODZ
延伸因子G1抗體 英文縮寫:GOLGA3
β葡萄糖苷酶2抗體 英文縮寫:GOLGA5
β葡萄糖苷酶3抗體 英文縮寫:GOLGA6
膠質(zhì)母細胞瘤相關(guān)蛋白GBAS抗體 英文縮寫:GOLGA6L4
紅細胞糖苷α1抗體 英文縮寫:GOLGA7
G蛋白結(jié)合蛋白1抗體 英文縮寫:Golgi Complex
G蛋白結(jié)合蛋白4抗體 英文縮寫:Golgin 97
G蛋白結(jié)合蛋白6體 英文縮寫:Golgin subfamily A member 4
鳥苷酸環(huán)化酶激活蛋白1抗體 英文縮寫:GOLPH2
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATG隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。