詳細(xì)介紹
準(zhǔn)備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
產(chǎn)品名稱 | 轉(zhuǎn)基因品系南瓜CZW-3 PCR試劑盒 |
英文名稱 | Czw-3 PCR kit for transgenic pumpkin |
貨號(hào) | YSP96778 |
?自備物品:
15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標(biāo)板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標(biāo)儀:用于微量樣品比色分析
儲(chǔ)存條件:
14℃或-20℃
產(chǎn)品僅用于科研注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測(cè)中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATG隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
產(chǎn)品僅用于科研引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
白介素4(IL4) 規(guī)格:20mg 英文:WNT3A
白介素4(IL4) 規(guī)格:1g 英文:RelB
白介素4(IL4) 規(guī)格:20mg 英文:VAV3
白介素4(IL4) 規(guī)格:50mg 英文:RAD23A
白介素4受體(IL4R) 規(guī)格:100mg 英文:SNRPA
白介素4誘導(dǎo)蛋白1(IL4I1) 規(guī)格:20mg 英文:Tgtp
白介素5(IL5) 規(guī)格:100mg 英文:TCR
白介素5(IL5) 規(guī)格:100mg 英文:TALLA-1/CD231
白介素5(IL5) 規(guī)格:170ng/支 英文:LAT
白介素5(IL5) 規(guī)格:1000mg 英文:CD1A
白介素5(IL5) 規(guī)格:3g 英文:TU3A
白介素5(IL5) 規(guī)格:1000mg 英文:TREML1
白介素5(IL5) 規(guī)格:100mg 英文:T2BP
白介素5(IL5) 規(guī)格:200mg 英文:TOLLIP
白介素5(IL5) 規(guī)格:50mg 英文:TLR-9/CD289
Ermanin醋酸環(huán)丙孕酮(標(biāo)準(zhǔn)品) 分子式:C18H19NO5 純度:97.0%
Mearnsetin甲地孕酮 分子式:C19H22N2O3 純度:97.5%
4',5-Dihydroxy-3',5',6,7-tetramethoxyflavone甲地孕酮(標(biāo)準(zhǔn)品) 分子式:C17H17NO4 純度:98.0%
Kaempferol 7,4'-dimethyl ether3-縮酮 分子式: 性狀:C20H19N2O3 純度:97.5%
2''-O-Coumaroyljuglanin索拉非尼 分子式:C19H21NO5 純度:97.0%
Heveaflavone二磷酸組胺;磷酸組胺 分子式:C21H24N2O3 純度:98.0%
Isochamaejasmin磷酸氯喹,氯喹二磷酸鹽 分子式:C13H11NO 純度:%
7-Hydroxy-5,8-dimethoxyflavanone(-)-莨菪堿,L-天仙子胺,L-天仙子堿 分子式:C13H9NO3 性狀:Yellow powder 純度:97.5%
7,4'-Di-O-methylapigenin(-)-莨菪堿,L-天仙子胺,澳洲毒茄堿(標(biāo)準(zhǔn)品) 分子式:C13H9NO2 性狀:Yellow powder 純度:97.0%
轉(zhuǎn)基因品系南瓜CZW-3 PCR試劑盒范可尼綜合征相關(guān)蛋白FANCC抗體 英文縮寫:FAM107A
FXYD離子轉(zhuǎn)運(yùn)調(diào)節(jié)因子6抗體 英文縮寫:FAM113A
Fyn結(jié)合蛋白抗體 英文縮寫:FAM120B
鋅指蛋白FYCO1抗體 英文縮寫:FAM120C
FYTTD1蛋白抗體 英文縮寫:FAM123B
RNA結(jié)合蛋白9抗體 英文縮寫:FAM123B
巖藻糖轉(zhuǎn)移酶11抗體 英文縮寫:FAM126A
干擾素誘導(dǎo)蛋白15抗體 英文縮寫:FAM129A
P38相互作用蛋白抗體 英文縮寫:FAM129B
鈣粘樣蛋白28抗體 英文縮寫:FAM134B