詳細(xì)介紹
準(zhǔn)備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
產(chǎn)品名稱 | 轉(zhuǎn)基因品系番茄1345-4 PCR試劑盒 |
英文名稱 | PCR kit for transgenic tomato 1345-4 |
貨號(hào) | YSP96767 |
?自備物品:
15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標(biāo)板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標(biāo)儀:用于微量樣品比色分析
儲(chǔ)存條件:
14℃或-20℃
產(chǎn)品僅用于科研注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測(cè)中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。
(3) 簡(jiǎn)便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATG隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無明顯同源性。
產(chǎn)品僅用于科研引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
豬瘟英文名稱:Collagen II英文簡(jiǎn)稱Col II 檢測(cè)范圍:7272nmol/L-40ng/mL
豬瘟病毒英文名稱:Proteasome Subunit Beta Type 5英文簡(jiǎn)稱PSMb5 檢測(cè)范圍:1638nmol/L-20ng/mL
豬瘟病毒包膜糖蛋白E2英文名稱:melanocyte IgM antibody英文簡(jiǎn)稱MC IgM Ab 檢測(cè)范圍:1909nmol/L-30ng/mL
豬藍(lán)耳病英文名稱:transforming growth factor 英文簡(jiǎn)稱TGF 檢測(cè)范圍:7506nmol/L-800pg/mL
豬藍(lán)耳病M蛋白英文名稱:Interleukin 17A英文簡(jiǎn)稱IL-17A 檢測(cè)范圍:7392nmol/L-32pg/mL
豬藍(lán)耳病GP5蛋白英文名稱:Hepatitis A virus type antibody 3英文簡(jiǎn)稱HAV-Ab 3 檢測(cè)范圍:7346nmol/L-
豬繁殖與呼吸綜合征/豬藍(lán)耳病英文名稱:carbonic anhydrase III英文簡(jiǎn)稱CA-III 檢測(cè)范圍:7578nmol/L-48U/L
珠蛋白轉(zhuǎn)錄因子1英文名稱:DOPAC英文簡(jiǎn)稱DOPAC 檢測(cè)范圍:4460nmol/L-
Eplerenone 規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 AHA3(擬南芥)
Etodolac 規(guī)格:>98.5%,BR A-Raf
Etodolac 規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 紅細(xì)胞腺苷脫氨酶3
Etonogestrel 規(guī)格:>98% 星形膠質(zhì)細(xì)胞
Everolimus;RAD001 規(guī)格:>95%,mTOR抑制劑,BR 醛縮酶A
FluocinoloneAcetonide 規(guī)格:>98%,BR 雄激素結(jié)合蛋白
FluocinoloneAcetonide 規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 肝再生增強(qiáng)因子
Flupirtinemaleate 規(guī)格:>98% APP/ABPP淀粉樣肽前體蛋白
Flupirtinemaleate 規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 甲胎蛋白單克?。ò唬?/span>
轉(zhuǎn)基因品系番茄1345-4 PCR試劑盒口蹄疫病毒A型抗體(N端) 英文縮寫:ETEA
腎刷狀緣抗體 英文縮寫:ETFA
FLAG Tag標(biāo)簽抗體(N端) 英文縮寫:ETFB
FAM166A蛋白抗體 英文縮寫:ETFDH
脂肪酸合成酶抗體 英文縮寫:ETHE1
腦型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體(C端) 英文縮寫:ETL
磷酸化纖維束蛋白同源物1抗體 英文縮寫:ETNK2
粘著斑激酶抗體 英文縮寫:ETS1
凝血因子5抗體 英文縮寫:ETS1 associated protein II
成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子10抗體 英文縮寫:ets1/E26 (E-twenty six 1)