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          蛋白激酶Cδ(PKCd)重組蛋白

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          • 所在地 上海市

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          更新時間:2023-03-31 09:53:20瀏覽次數(shù):361

          聯(lián)系我們時請說明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息,謝謝!

          產(chǎn)品簡介

          供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 說明書
          應(yīng)用領(lǐng)域 化工 主要用途 科研實驗
          英文名稱 Recombinant Protein Kinase C Delta (PKCd) 物種 Homo sapiens (Human,人)
          來源 原核表達(dá) 應(yīng)用 Cell culture; Activity Assa
          蛋白激酶Cδ(PKCd)重組蛋白的相關(guān)產(chǎn)品:角鯊烯單加氧酶(SQLE)重組蛋白 物種; Homo sapiens (Human,人) 來源; 原核表達(dá) 性狀:凍干粉 唾液酸乙酰酯酶(SIAE)重組蛋白 物種; Homo sapiens (Human,人) 來源; 原核表達(dá) 性狀:凍干粉 核黃素激酶(RFK)重組蛋白 物種; Homo sapiens (Human,人) 來源; 原核表達(dá) 性狀:凍干

          詳細(xì)介紹

          標(biāo)簽選擇:

          親和標(biāo)簽:蛋白重組表達(dá)過程中采用親和標(biāo)簽融合表達(dá)有兩方面的作用:一方面是為了使蛋白純化過程變得更加容易;另一方面是為了促進某些不溶性蛋白可溶。蛋白標(biāo)簽可分兩類:一類是短肽類標(biāo)簽;一類是長肽以融合蛋白(fused partner)形式共表達(dá)。使用不同的蛋白標(biāo)簽需要根據(jù)具體案例來分析。

          不同的系統(tǒng)步驟稍微有些不同的,大致步驟如下:

          真核表達(dá)系統(tǒng)的重組蛋白表達(dá)步驟:

          a.      選擇表達(dá)載體和宿主細(xì)胞(常用的CHOHEK293

          b.      表達(dá)載體的構(gòu)建

          c.      無內(nèi)毒素的質(zhì)粒抽提

          d.      細(xì)胞瞬時轉(zhuǎn)染

          e.      表達(dá)小試,條件優(yōu)化

          f.       表達(dá)分析和鑒定(SDS-PGAEWB

          g.      大量表達(dá)

          h.      親和純化

          i.        檢測和鑒定

          僅供科研實驗產(chǎn)品屬性:

          產(chǎn)品名稱

          物種

          性狀

          來源

          蛋白激酶Cδ(PKCd)重組蛋白

          Homo sapiens (Human,人)

          凍干粉

          原核表達(dá)

          英文名稱:Recombinant Protein Kinase C Delta (PKCd)

          PKC-D; MAY1; PRKCD; SDK1; NPKC-Delta; Tyrosine-protein kinase PRKCD; Sphingosine-dependent protein kinase-1

          酶與激酶

          物種:Homo sapiens (Human,人)

          來源:原核表達(dá)

          宿主E.coli

          內(nèi)毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法測定)

          亞細(xì)胞定位::n/a

          預(yù)測分子量:43.4kDa

          實際分子量:-(差異分析請參閱說明書)

          片段與標(biāo)簽:Asn330~His672 with

          緩沖液成份:磷酸鹽緩沖液(pH7.4,含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% TrehaloseProclin300.

          性狀:凍干粉

          純度:>90%

          等電點:-

          應(yīng)用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.

          規(guī)格10μg 50μg 200μg 1mg 5mg

          相關(guān)產(chǎn)品:

          多胺氧化酶(PAOX)重組蛋白 物種; Mus musculus (Mouse,小鼠) 來源; 原核表達(dá) 性狀:凍干粉

          芳基硫酸酯酶F(ARSF)重組蛋白 物種; Homo sapiens (Human,人) 來源; 原核表達(dá) 性狀:凍干粉

          法尼基轉(zhuǎn)移酶α(FNTa)重組蛋白 物種; Homo sapiens (Human,人) 來源; 原核表達(dá) 性狀:凍干粉

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          原核表達(dá)系統(tǒng)的重組蛋白表達(dá)步驟:

          a.      選擇表達(dá)載體

          b.      密碼子優(yōu)化

          c.      基因合成/亞克隆

          d.      轉(zhuǎn)化表達(dá)菌株

          e.      蛋白表達(dá)小試分析

          f.       如果蛋白可溶,蛋白親和純化

          g.      如果蛋白不可溶,則需要變復(fù)性來制備可溶蛋白。

          h.      鑒定,包括SDS-PAGEWB鑒定

          GZMH蛋白;表達(dá)蛋白的分析、純化、檢測

            誘導(dǎo)表達(dá)成功后,表達(dá)蛋白的分析、純化、檢測應(yīng)該順當(dāng),按一般的實驗步驟做沒太大的問題。

          操作步驟 :

          根據(jù)使用量,取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF,使 PMSF zui終濃度為 1mM?;靹騻溆茫?span>PMSF 現(xiàn)用現(xiàn)加)。

          1、樣品前處理:

          a)對于貼壁細(xì)胞:去除培養(yǎng)液,用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。按照 6 孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細(xì)胞充分接觸。

          b)對于懸浮細(xì)胞:離心收集細(xì)胞,用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液,再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多,必需分裝成 50-100 萬細(xì)胞/管,然后再裂解。

          c)對于組織樣品: 切成細(xì)小的碎片。按照每 20mg 組織加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當(dāng)減少裂解液的用量)。用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。

          2、后處理:

          將裂解后的樣品 10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進行后續(xù)的蛋白濃度測定、SDS-PAGEWestern blotting 和免疫沉淀等操作。

          蜂房小甲蟲PCR檢測試劑盒 規(guī)格 50T 英文; Aethina tumidaPCR

          奮森疏PCR檢測試劑盒 規(guī)格 50T 英文; Borrelia vincentiPCR

          肺炎克雷伯菌PCR檢測試劑盒 規(guī)格 50T 英文; Klebsiella pnenmoniaePCR

          放線菌屬通用PCR檢測試劑盒 規(guī)格 50T 英文; Actinomyces spp.PCR

          大鼠白介素21(IL-21)ELISA試劑盒 ,英文名: IL-21 ELISA Kit

          Mouse leukemia inhibitory factor receptor (LIFR) ELISA Kit 小鼠白血病抑制因子受體(LIFR)ELISA試劑盒

          ELISA 小鼠白介素-1RA(mouse IL-1ra) 48T/96T 進口分裝

          CLIAKitforIL-7(RatIerleukin-7)ELISAkit大鼠白介素7規(guī)格:48T/96T

          通用型灰斑病灰梨孢菌(GreyLeafSpotPyriculariagrisea)試劑盒20

          ELISAKitGlp-1大鼠胰高血糖素樣肽1規(guī)格:48T/96T

          蛋白激酶Cδ(PKCd)重組蛋白鴨沙門氏菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Salmonella anatumPCR

          鴨瘟病毒PCR檢測試劑盒 英文名稱; Duck Plague Virus(DPV)PCR

          鴨腺病毒PCR檢測試劑盒 英文名稱; Duck AdenovirusPCR

          鴨乙型肝炎病毒PCR檢測試劑盒 英文名稱; Duck Hepatitis B Virus(DHBV)PCR

          注意事項:  

          1、不同細(xì)胞或組織樣品所需的固定時間有所不同,應(yīng)當(dāng)根據(jù)細(xì)胞或組織的種類以及組織塊的大小來調(diào)整固定時間。

          2、雖然作用溫和,但能硬化組織,固定時間過久會導(dǎo)致組織變脆,切片時易碎。因此固定時間通常不宜超過 24 小時。

          3、醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基,使抗原決定簇的三維構(gòu)象出現(xiàn)空間障礙。分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或 掩蓋某些抗原決定簇,使之不能充分暴露,可造成假陰性的染色,影響免疫組化結(jié)果。因此,4%固定的細(xì)胞或組織樣品在進行免疫組化檢測時,有時需要對抗原先進行修復(fù),然后才能進行免疫染色等后續(xù)操作。

          4、本產(chǎn)品對人體有害,操作時請小心,并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。

          5、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作


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