詳細(xì)介紹
自備物品:
15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標(biāo)板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標(biāo)儀:用于微量樣品比色分析
產(chǎn)品僅用于科研儲存條件:
14℃或-20℃
注意事項:1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學(xué);8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱 | 轉(zhuǎn)基因品系大豆GTS40-3-2染料法qPCR試劑盒 |
英文名稱 | Dye qPCR kit for transgenic soybean gts40-3-2 |
貨號 | YSP96678 |
準(zhǔn)備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
反應(yīng)五要素:
產(chǎn)品僅用于科研參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATG隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中小檢出率為3個細(xì)菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
PhosphoRSK2 (Ser227) 核糖體S6激酶RSK2 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.1ml N2Phenoxyacetyl Guanine
PhosphoRSK2(Tyr529) 核糖體S6激酶RSK2 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.1ml 6OMethyld3guanine
RSK3/Ribosomal S6 kinase 3 核糖體蛋白S6激酶家族RSK3 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml N7(2Carbamoyl2hydroxyethyl)guanine
PhosphoRSK3 (Thr353/356) 核糖體蛋白S6激酶家族RSK3 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.1ml 2Amino6,8dihydroxypurine Hydrochloride
PhosphoRSK3 (Thr356/Ser360) 核糖體蛋白S6激酶家族RSK3 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.1ml alltrans Retinoic Acid Methyl Ester
RSV 呼吸道合胞病毒 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.1ml 13cis Retinoic Acid Methyl Ester
RXR Alpha/RXRA/Retinoid X receptor 核受體RXRα 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.1ml rac 4Hydroxy9cisretinoic Acid
RXR gamma 維受體G 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Caged Retinoic Acid
Duck Hepatitis A Virus 3 antibody英文簡稱DHAV3Ab早幼粒細(xì)胞白血病鋅指蛋白 檢測范圍:7330nmol/L
DLactate Dehydrogenase英文簡稱DLDH蛋白酶調(diào)解因子10 檢測范圍:7331nmol/L80ng/mL
Ca2+ATPase英文簡稱Ca2+ATPaseRho相關(guān)結(jié)構(gòu)域BTB蛋白質(zhì)1 檢測范圍:7332nmol/L80U/L
Pasteurella antibody英文簡稱Pasteurella Ab天門冬甲基轉(zhuǎn)移酶PCMT 檢測范圍:7333nmol/L
progesterone receptor英文簡稱PGR絲/蘇蛋白激酶39 檢測范圍:7334nmol/L8ng/mL
Estradiol receptor英文簡稱ER端粒保護蛋白1 檢測范圍:7335nmol/L2000pg/mL
Riemerella Aanatipestifer antibody英文簡稱RAAb腦胰蛋白酶3 檢測范圍:7336nmol/L
Riemerella Aanatipestifer antibody英文簡稱RAAb前列腺癌相關(guān)蛋白2 檢測范圍:7337nmol/L
Ra1英文簡稱Ra1細(xì)胞表面受體PILRβ 檢測范圍:7338nmol/L
Ra英文簡稱Ra絲蛋白酶10 檢測范圍:7339nmol/L
viral gastroenteritis antibody英文簡稱VGAb性酶 檢測范圍:7340nmol/L
Bone morphogenetic protein 6英文簡稱BMP6前列腺性酶 檢測范圍:7341nmol/L12ng/mL
tartrateresistant acid phosphatase英文簡稱TRAP三腺苷受體受體P2X3 檢測范圍:7342nmol/L40mIU/ml
Antibacterial Peptide Dcath英文簡稱Dcath乳腺癌相關(guān)蛋白DRES17 檢測范圍:7343nmol/L3000pg/mL
flag英文簡稱flag輔肌動蛋白相關(guān)LIM蛋白 檢測范圍:7344nmol/L20ng/ml
轉(zhuǎn)基因品系大豆GTS40-3-2染料法qPCR試劑盒陽離子通道精子相關(guān)蛋白4抗體 英文縮寫:Cyclin A1
胞漿動力蛋白中間鏈1抗體 英文縮寫:Cyclin A2
胞漿動力蛋白中間鏈2抗體 英文縮寫:Cyclin B1
抑癌蛋白DKK3抗體 英文縮寫:Cyclin B1
單克隆抗體 英文縮寫:Cyclin B2
腫瘤壞死因子配體超家族成員10C 英文縮寫:Cyclin B3
干擾素誘導(dǎo)蛋白p58ipk抗體 英文縮寫:Cyclin C
轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子DACH2抗體 英文縮寫:Cyclin C
穿膜蛋白DLK1抗體 英文縮寫:Cyclin D1
Dysferlin蛋白抗體 英文縮寫:cyclin D1