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選對了ELISA試劑盒用對了試驗技巧，就會讓您的試驗功率事半功倍
閱讀：838 發(fā)布時間：2019-1-25
說到ELISA Kit，信任大家都不會陌生。ELISA Kit的誕生，是為了幫助科研作業(yè)者省掉繁瑣的試驗過程，進步科研功率。假如選對了試劑盒，用對了試驗技巧，就會讓您的試驗功率事半功倍。
一.如何選購ELISA Kit
市面上任意品牌的一個ELISA Kit售價都在1000元以上假如選錯了試劑盒輕則丟失一筆科研經(jīng)費重則毀掉整個試驗課題所以選個對的，很有必要！市面上的ELISA Kit質(zhì)量良莠不齊，想要挑選到適宜的試劑盒還真不是一件很容易的事情。真真假假，難以區(qū)分。
1 查找待測樣本的蛋白濃度：能夠通過NCBI的文獻，uniprot，pax-dab上給出的蛋白表達量參閱值來比較ELISA試劑盒中給出的樣本值與報道值是否一致；
2 試劑盒的應用種屬、檢測樣本的品種：除試劑盒特別闡明外，一般不同種屬不能通用。常見待測樣本品種有：血清和血漿（不同抗凝劑），細胞上清，和細胞裂解液，試劑盒中不同樣本的稀釋液不混用；
3 試劑盒的檢測規(guī)模：也就是標曲規(guī)別要注意待測樣本濃度是否落在標曲規(guī)模內(nèi)，關(guān)于濃度很高的樣本，能夠先進行預試驗摸索到比較好的稀釋倍數(shù)后再很多測定樣本。
4 試劑盒中的稀釋線性及回收率：
a.稀釋線性一般指樣本稀釋線性，是將樣本梯度稀釋下來，看各稀釋梯度濃度是否成線性；參閱樣本稀釋線性能夠挑選樣本的稀釋倍數(shù)；
b.稀釋線性也有做加標稀釋線性的情況，加標稀釋線性是將規(guī)范品參加樣本中測定參加的規(guī)范品濃度測定是否準確；同樣也是斷定待測樣本稀釋倍數(shù)的參閱指標。一般線性和回收率的規(guī)模在80%-120%比較適宜；
5 試劑盒的其它指標：
a.靈敏度：試劑盒能夠檢測到的樣本低濃度的才干，假如待檢指標含量很低，需求挑選高靈敏度的ELISA試劑盒；
b.板間和板內(nèi)的變異系數(shù)（CV%）:反映板內(nèi)和不同板之間是否均勻，CV%一般小于10% 比較好。
6 試劑盒的有效期：試劑盒的有效期一般是半年至一年，樣本準備時刻需求考慮到試劑盒的有效期。
二.ELISA Kit 運用技巧
選對ELISA Kit只是步要想獲得理想的試驗成果還需掌握運用技巧所以用對了，才干事半功倍！Bio-Swamp試劑盒團隊，歷經(jīng)多年的實踐，總結(jié)了ELISA Kit運用技巧，與您分享。
1 樣本的準備：盡量運用新鮮樣本，不運用有溶血，被細菌污染、標本保存時刻過長和標本凝結(jié)不全的樣本。ELISA檢測宜采集新鮮標本，如不能立即測定，5天之內(nèi)應4℃保存，關(guān)于1周后檢測的樣本應低溫凍存；做好分裝，長時刻凍存的樣本防止反復凍融。
2 仔細閱讀闡明書，了解整個流程，推薦畫出扼要步驟圖；提早準備試劑，比如常見20X洗滌液是濃縮液，需求用超純水提早稀釋準備好。一般的檢測抗體和酶標二抗需求用對應的稀釋液稀釋至作業(yè)濃度。
3 不同批次的試劑不要混用，查看各組分的有效期。
4 預包被的酶標板條和各試劑組份需求室溫平衡30 min以上，這樣做的意圖能使反響微孔內(nèi)的溫度較快地到達所需溫度，預防后續(xù)試驗中由于孵育溫度或是時刻不行充沛，而將一些弱陽性樣本不能檢出。
5 待測樣本加樣：待檢樣本過多時，建議分批操作；需求稀釋的樣本提早做好稀釋，注意選對適宜稀釋液；控制好加樣時刻，防止加樣費時過長造成誤差；注意加樣視點，垂直參加孔底，不要接觸孔壁, 做到一份樣本一個移液頭，防止交叉污染。
6 溫育和洗板：溫育時刻和溫度一般根據(jù)試劑盒的闡明書進行挑選。溫育時能夠選用水浴或許濕盒孵育,防止“邊緣效應”。①手工洗板時，拍板時要垂直，防止交叉污染，用力不能過猛，防止抗原抗體復合物脫離；②洗板機洗板時應經(jīng)常查看沖洗頭是否通暢。
7 顯色：市售ELISA 試劑盒中，一般是以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物的顯色液，反響條件為37℃或室溫反響15～30 min。顯色反響需求避光。
8 讀數(shù)和數(shù)據(jù)剖析：停止后讀取成果盡量在15min內(nèi)完成，讀取OD值時酶標儀需先預熱15～30 min再進行。數(shù)據(jù)剖析一般用四參數(shù)和直線擬合法，挑選哪種擬合方式，能夠根據(jù)標曲的相關(guān)系數(shù)（R2）來斷定，R2一般需求大于0.99。