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          四角瑞氏絳蟲PCR試劑盒檢測方法步驟

          閱讀:176          發(fā)布時間:2021-6-21

          四角瑞氏絳蟲PCR試劑盒檢測方法包括以下步驟:
          (1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接,克隆到同一個質(zhì)粒載體上,構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品,并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線;
          (2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實時熒光定量PCR擴(kuò)增后,目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù),計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值,即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
          其中步驟(1)為:將參照基因與待測目的基因片段等比例連接,克隆到同一個質(zhì)粒載體上,構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品,并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
          其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因,較佳地管家基因,優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域,其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體,較佳地為PCR克隆載體,優(yōu)選地為TA cloning載體,所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1:1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1,解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題,提高HER2基因擴(kuò)增檢測的可靠性。
          步驟(2)為:待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實時熒光定量PCR擴(kuò)增后,目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù),計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值,即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。 小鼠腦啡肽原A(PENK)ELISA Kit
          小鼠內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素(visfatin)ELISA Kit
          小鼠內(nèi)臟脂肪特異性絲氨酸蛋白酶抑制劑(vaspin)ELISA Kit
          小鼠內(nèi)分泌腺來源的血管內(nèi)皮生長因子(EG-VEGF)ELISA Kit
          小鼠繆勒管抑制物質(zhì)/抗繆勒管激素(AMH)ELISA Kit
          小鼠免疫球蛋白G4(IgG4)ELISA Kit
          小鼠免疫球蛋白D(IgD)ELISA Kit
          小鼠輪狀病毒(RV)抗原(Ag)ELISA Kit
          小鼠卵清蛋白特異性IgG(OVA sIgG)ELISA Kit
          小鼠卵清蛋白特異性IgE(OVA sIgE)ELISA Kit
          小鼠硫脂(SULF)抗體ELISA Kit
          小鼠硫氧化還原蛋白(Trx)ELISA Kit
          小鼠流行性乙型腦炎(JE)抗體(IgG)ELISA Kit
          小鼠磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC-3)ELISA Kit
          小鼠磷脂酶D2(PLD2)ELISA Kit
          小鼠磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PCK)ELISA Kit
          小鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(pAMPK)ELISA Kit
          小鼠磷酸化細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶(pERK)ELISA Kit
          小鼠磷酸化酪氨酸蛋白激酶JAK3(pJAK3)ELISA Kit
          小鼠磷酸化核因子-κB(p-NF-κB)ELISA Kit
          小鼠磷酸化蛋白激酶C(P-PKC)ELISA Kit
          小鼠磷酸化蛋白激酶B(P-PKB)ELISA Kit
          小鼠磷酸化表皮生長因子受體(pEGFR)ELISA Kit

           

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