詳細(xì)介紹
細(xì)胞名稱 人葡萄膜黑色素細(xì)胞;UM培養(yǎng)
形態(tài)特性 多角
品牌 貼壁生長(zhǎng)
特征特性
培養(yǎng)條件 F12:
Ham's F12 Nutrient Mixture 10%FBS;bFGF,霍亂毒素,異丁基甲基黃嘌呤IBMX4.4mg/200ml
傳代方法 1:
3傳代;3~4天1次。
傳代情況 P5
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 培養(yǎng)法(-)
STR Amelogenin:X,Y;CSF1PO:10,12;D13S317:10,11;D16S539:9,11,12;D18S51:13,15,16;D19S433:13,16.2;D21S11:28,30,31.2;D2S1338:17,OL,19,22;D3S1358:15;D5S818:9,11;D7S820:10,11,12;D8S1179:10,12,14;FGA:24;TH01:9,9.3;TPOX:9,11;vWA:17,18;
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
人葡萄膜黑色素細(xì)胞;UM培養(yǎng)貼壁細(xì)胞: 對(duì)于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強(qiáng)度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進(jìn)行消化,(根據(jù)經(jīng)驗(yàn)),晃動(dòng)使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動(dòng)瓶底使細(xì)胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細(xì)胞基本成單個(gè)懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長(zhǎng)至60%~70%融合時(shí),用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中,每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計(jì)算貼壁率。
1.6 生長(zhǎng)曲線 取指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔,計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線
SDPR(human serum deprivation response) ELISA Kit 人血清剝奪反應(yīng)相關(guān)蛋白Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-Protein G 重組蛋白G抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh HDHD1 HDHD1蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
AQP-1 ELISA Kit 大鼠水通道蛋白1 96T
4 英文名稱: 腦特異性多肽蛋白19抗體 0.1ml
CAMSAP1 英文名稱: 鈣調(diào)素調(diào)節(jié)蛋白相關(guān)蛋白抗體 0.2ml
Anti-Protein G 重組蛋白G抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
大鼠Smad7 ELISA Kit 大鼠Smad7Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-TRAF6 壞死因子受體相關(guān)因子6抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh GK5/Glycerokinase 5 甘油激酶5抗體 規(guī)格 0.2ml
TAFI ELISA Kit 大鼠纖溶抑制因子/凝血酶激活的纖溶抑制物 96T
NDUFA9 英文名稱: NDUFA9蛋白抗體 0.2ml
beta Amyloid 1-42 英文名稱: β淀粉樣肽(1-42)抗體 0.1ml
Anti-TRAF6 壞死因子受體相關(guān)因子6抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
人轉(zhuǎn)錄因子AP-1(Transcription factor AP-1) ELISA試劑盒人96T1.56-100 ng/mL小鼠Ⅰ型前膠原氨基端原肽(PⅠNP)ELISA試劑盒,英文名:PⅠNP ELISA KiISA Kit for Human Netrin receptor UNC5C大鼠蛋白激酶Cγ(PKCγ)ELISA試劑盒,英文名:PKCγ ELISA Kit人無翅型MMTV整合位點(diǎn)家族成員2(WNT2)ELISA試劑盒人96T0.156-10 ng/mL大鼠白介素20(IL20)ELISA試劑盒,英文名:IL20 ELISA Kit大鼠CD40配體(CD40L)ELISA試劑盒,英文名:CD40L ELISA Kit豚鼠促卵泡素(FSH)ELISA試劑盒,英文名:FSH ELISA Kit醛固酮(Aldosterone)ELISA試劑盒通用96T0.39-25 ng/mL小鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(TGFβ1)ELISA試劑盒,英文名:TGFβ1 ELISA KiISA Kit for Human cAMP-dependent transcription factor ATF-2小鼠血小板因子3(PF-3)ELISA試劑盒,英文名:PF-3 ELISA Kit
ELISA Kit for Human Latent-transforming growth factor beta-binding protein 4大鼠蔗糖酶異麥芽糖酶(SI)ELISA試劑盒,英文名:SI ELISA Kit人血小板解整合素樣金屬蛋白酶20(ADAMTS20)ELISA試劑盒人96T78-5000 pg/mL小鼠鐵調(diào)素(Hepc)ELISA試劑盒,英文名:Hepc ELISA KiISA Kit for Human Aquaporin-4小鼠前列腺酸性磷酸酶(PAP)ELISA試劑盒,英文名:PAP ELISA Kit人殺菌性通透性增加蛋白(BPI)ELISA試劑盒人96T78-5000 pg/mL小鼠可溶性肌球蛋白重鏈1(sMHC-1)ELISA試劑盒,英文名:sMHC-1 ELISA Kit人白介素25(IL25/C19orf10)ELISA試劑盒人96T15.6-1000 pg/mL小鼠骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPR-Ⅱ)ELISA試劑盒,英文名:BMPR-Ⅱ ELISA Kit人胱硫醚γ裂解酶 (Cystathionine gamma-lyase)ELISA試劑盒人96T0.78-50 ng/mL小鼠白介素33(IL-33)ELISA試劑盒,英文名:IL-33 ELISA Kit人歸巢相關(guān)細(xì)胞黏附分子/CD44分子(HCAM/CD44)ELISA試劑盒人96T0.156-10 ng/mL小鼠B細(xì)胞活化因子(BAFF)ELISA試劑盒,英文名:BAFF ELISA Kit
預(yù)染蛋白Marker分子量標(biāo)準(zhǔn)(10-250kDa) 10次 MBI分裝
ZNF230 英文名稱: 鋅指蛋白230抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-Dab1 (Ser491) 磷酸化Disabled 1抗體 規(guī)格 0.1ml
GFP (Green Fluorecent protein) 綠色熒光蛋白多肽抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
DACH1 英文名稱: 細(xì)胞命運(yùn)決定因子DACH1抗體 0.2ml
GOLM1 GOLM1 / GP73 鼠單抗 (FITC) Human
Human Cartilage glycoprotein 39,HC gp-39 ELISA Kit 人軟骨糖蛋白39Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-Phospho-MYPT1 (Thr853) 磷酸化肌球蛋白磷酸酶抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh Goat Anti-Mouse IgM/Gold 膠體金標(biāo)記的羊抗小鼠IgM 規(guī)格 0.5ml
(Mouse mammary carcinoma Marker-CA153) ELISA Kit 小鼠癌標(biāo)志物-CA153 96T
Neurotrimin 英文名稱: 神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子HNT抗體 0.2ml
BAG2 英文名稱: Bcl-2結(jié)合抑凋亡蛋白2抗體 0.1ml
Anti-Phospho-MYPT1 (Thr853) 磷酸化肌球蛋白磷酸酶抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會(huì)有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。