詳細(xì)介紹
細(xì)胞名稱 Asp2人胚胎腎細(xì)胞轉(zhuǎn)化細(xì)胞;FC33培養(yǎng)
形態(tài)特性 上皮樣;多角
品牌 貼壁生長(zhǎng)
特征特性 帶有編碼多組氨酸的Asp-2基因轉(zhuǎn)染293細(xì)胞,用于阿爾茨海默病的研究;表達(dá)Asp-2基因。
培養(yǎng)條件 DMEM-H:
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS;250ug/ml G418
傳代方法 1:
3傳代;3~4天1次。
傳代情況 不詳
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 培養(yǎng)法(-)
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
Asp2人胚胎腎細(xì)胞轉(zhuǎn)化細(xì)胞;FC33培養(yǎng)操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長(zhǎng)至60%~70%融合時(shí),用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中,每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計(jì)算貼壁率。
1.6 生長(zhǎng)曲線 取指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔,計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線
貼壁細(xì)胞: 對(duì)于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強(qiáng)度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進(jìn)行消化,(根據(jù)經(jīng)驗(yàn)),晃動(dòng)使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動(dòng)瓶底使細(xì)胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細(xì)胞基本成單個(gè)懸浮,然后分置其它無(wú)菌培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語(yǔ)的定義會(huì)有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過(guò)了遺傳改造。
INS ELISA Kit 大鼠胰島素Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-Na,K-ATPase alpha-1 (Phospho Ser23) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化鈉鉀ATP酶蛋白a1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh FABPB 腦型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
pACCase ELISA Kit 大鼠磷酸化乙酰輔酶A羧化酶 96T
CCL3 英文名稱: 巨噬細(xì)胞炎癥因子1α抗體 MIP-1α 0.1ml
AP2 beta 英文名稱: 銜接蛋白β抗體 0.1ml
Anti-Na,K-ATPase alpha-1 (Phospho Ser23) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化鈉鉀ATP酶蛋白a1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
VD3 ELISA Kit 大鼠維生素D3Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-ADRB2/FITC 熒光素標(biāo)記腎上腺素能受體β2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh FCHSD1 FCHSD1蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
Mouse trypsin ELISA Kit 小鼠胰蛋白酶 96T
MAP1LC3A 英文名稱: 自噬微管相關(guān)蛋白輕鏈3抗體 0.1ml
ADAM12 英文名稱: 去整合素樣金屬蛋白酶12 0.2ml
Anti-ADRB2/FITC 熒光素標(biāo)記腎上腺素能受體β2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
人毛球族同族體3(TRB-3)ELISA試劑盒人96T0.156-10 ng/mL大鼠激肽釋放酶6(KLK6)ELISA試劑盒,英文名:KLK6 ELISA KiISA Kit for Human Plaet-activating factor acetylhydrolase IB subunit gamma大鼠白介素2(IL-2)ELISA試劑盒,英文名:IL-2 ELISA Kit人磷脂酰肌醇聚糖合成類蛋白F(PIG-F)ELISA試劑盒人96T0.312-20 ng/mL大鼠FMS樣酪氨酸激酶3配體(Flt3L)ELISA試劑盒,英文名:Flt3L ELISA KiISA Kit for Human Ras-related protein Rab-*鼠白細(xì)胞介素2(IL-2)ELISA試劑盒,英文名:IL-2 ELISA Kit人精液凝固蛋白1(Semenogelin-1)ELISA試劑盒人96T1.56-100 ng/mL大鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白5(IGFBP5)ELISA試劑盒,英文名:IGFBP5 ELISA KiISA Kit for Human Semaphorin-3A大鼠吻素1(KISS1)ELISA試劑盒,英文名:KISS1 ELISA Kit人分泌型卷曲蛋白1 (FRP-1)ELISA試劑盒人96T0.78-50 ng/mL大鼠色胺酸羥化酶1(TPH1)ELISA試劑盒,英文名:TPH1 ELISA Kit
人基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)ELISA試劑盒人96T0.312-20 ng/mL大鼠二價(jià)金屬轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(DMT1)ELISA試劑盒,英文名:DMT1 ELISA KiISA Kit for Human E-selectin大鼠淋巴毒素β(LTβ)ELISA試劑盒,英文名:LTβ ELISA KiISA Kit for Human Thyroid hormone receptor alpha大鼠谷光甘肽合成酶(GSS)ELISA試劑盒,英文名:GSS ELISA KiISA Kit for Human Versican core protein大鼠丙酮酸脫氫酶激酶同工酶4(PDK4)ELISA試劑盒,英文名:PDK4 ELISA Kit大鼠B-淋巴細(xì)胞趨化因子1(BLC1)ELISA試劑盒,英文名:BLC1 ELISA KiISA Kit for Human Pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide type I receptor小鼠腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體受體4(TRAIL-R4)ELISA試劑盒,英文名:TRAIL-R4 ELISA KiISA Kit for Human Arachidonate 12-lipoxygenase, 12S-type小鼠纖溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)ELISA試劑盒,英文名:PAI-1 ELISA Kit
兔抗IgG血清 0.5ml 國(guó)產(chǎn)
WFS1 英文名稱: Wolfram綜合征蛋白1抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-c-Jun(Thr91) 磷酸化原癌基因c-Jun抗體 規(guī)格 0.1ml
HO-1/HSP32 (Hemeo xygenase 1) 血紅素氧合酶-1/熱休克蛋白-32抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
DRD5 英文名稱: 多巴胺受體D5抗體 0.1ml
Anti-AAT α-1抗胰蛋白酶抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Anti-TGF- Beta3/FITC 熒光素標(biāo)記轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)因子–β3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
NIK,NF-kappaB-Inducing Kinase NFkB誘導(dǎo)的激酶(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
P物質(zhì)抗體 Anti-SP 0.1ml
5HT3C 英文名稱: 5-羥色胺受體3C抗體 0.1ml
eEF1A1 英文名稱: 翻譯延伸因子EF-1a抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-MAPK14(Thr180) 磷酸化p38MAPK抗體 規(guī)格 0.1ml
NIK,NF-kappaB-Inducing Kinase NFkB誘導(dǎo)的激酶(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg