詳細介紹
慢性粒細胞白血病細胞;K-562價格懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經(jīng)過了遺傳改造。
細胞名稱 慢性粒細胞白血病細胞;K-562價格
形態(tài)特性 成淋巴細胞
品牌 懸浮生長
特征特性 該細胞適合做轉染宿主,來自于一位53歲女性慢性粒細胞白血病人的胸腔積液
培養(yǎng)條件 IMDM:
Iscove's Modiefied Dulbecco's Medium 10%FBS
傳代方法 1:
3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 PN5
凍存條件 基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR AMEL:X,X;CSF1PO:9,10;D12S391:23,23;D13S317:8,8;D16S539:11,12;D18S51:
貼壁細胞: 對于貼壁細胞應先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,(根據(jù)經(jīng)驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或實驗。
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù),按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液=(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔,計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,繪制細胞生長曲線
Anti-P-HP1/FITC 熒光素標記抗異染色質蛋白1磷酸化抗體(果蠅)IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-HAS(human serum albumin) 兔抗人血清白蛋白 (親和層析純化)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
葡萄糖轉運蛋白4抗體 Anti-GLUT4 0.1ml
Rabbit Anti-Bovine IgM/FITC FITC標記的兔抗IgM 0.3ml
FAM101A 英文名稱: FAM101A蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-SHC (Tyr427) 磷酸化SH2結構域轉化蛋白1抗體 規(guī)格 0.1ml
Anti-HAS(human serum albumin) 兔抗人血清白蛋白 (親和層析純化)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
sFAS/Apo-1(Rat soluble Factor-related Apoptosis,sFAS/Apo-1 )ELISA Kit 大鼠可溶性凋亡相關因子Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-STEAP1 前列腺跨膜上皮1抗原抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Goat Anti-human IgG/Gold 膠體金標記的羊抗人IgG 規(guī)格 0.5ml
Hpt/HP ELISA Kit 大鼠結合珠蛋白/觸珠蛋白 96T
CDCA1 英文名稱: 細胞分裂周期相關蛋白1抗體 0.2ml
phospho-B-Raf (Ser446) 英文名稱: 磷酸化B-Raf抗體 0.1ml
Anti-STEAP1 前列腺跨膜上皮1抗原抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
TR ELISA Kit 大鼠凝血酶受體 96T
OPA1 英文名稱: 視神經(jīng)相關蛋白1抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh GPR30 G蛋白偶聯(lián)受體30抗體 規(guī)格 0.1ml
Human parathyroid hormone-like protein,PLP ELISA Kit 人甲狀旁腺激素樣蛋白Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
BCMA 英文名稱: B淋巴細胞成熟因子抗體 0.1ml
Anti-Sema7A/CD108 軸突生長因子CD108抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-BRMS-1/FITC 熒光素標記癌轉移抑制基因1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-GRM2+GRM4/FITC 熒光素標記促代謝型谷氨酸受體2+4抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh CHRNA7 煙堿型乙酰膽堿受體α7抗體 規(guī)格 0.1ml
AQP4(aquaporin Protein-4) 水通道蛋白-4(抗原) 0.5mg
ADM2 英文名稱: 中介素抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh TNFSF15/TL1A 壞死因子配體超家族成員15抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-GRM2+GRM4/FITC 熒光素標記促代謝型谷氨酸受體2+4抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml