詳細介紹
細胞名稱 人腦多型膠質(zhì)母細胞瘤細胞;BT-325培養(yǎng)
形態(tài)特性 成纖維細胞樣
品牌 貼壁生長
特征特性 該細胞系于1985年由北京神經(jīng)外科研究所建立。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 15%NBS
傳代方法 1:
3傳代;3-4天一次
傳代情況 PN4
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 熒光法(-)
STR Amelogenin:XY;D8S1179:13,15;D21S11:29,32.2;D7S820:12,13;CSF1PO:11, 13;D3S1358:15, 16;TH01:8, 9;D13
人腦多型膠質(zhì)母細胞瘤細胞;BT-325培養(yǎng)貼壁細胞: 對于貼壁細胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,(根據(jù)經(jīng)驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù),按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液=(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔,計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,繪制細胞生長曲線
Anti-PRAS40/AKT1 substrate 1/FITC 熒光素標記蛋白激酶AKT底物1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
dog IgG (親和純化) 狗IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 10mg
丙型肝炎病毒-NS3抗體 Anti-HCV-NS3 0.2ml
Mouse Anti-human IgG(3D3) 鼠抗人IgG單克隆抗體 1mg
FAM46C 英文名稱: FAM46C蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-RPS6KA1(Thr359) 磷酸化絲氨酸/蘇氨酸激酶p90RSK蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml
dog IgG (親和純化) 狗IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 10mg
sCD40L ELISA Kit 大鼠可溶性CD40配體Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-Amylin/FITC 熒光素標記兔抗糖尿病相關(guān)肽/胰島淀粉樣肽抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Fascin/Actin bundling protein 肌動蛋白結(jié)合蛋白Fascin抗體 規(guī)格 0.2ml
8-OHdG ELISA Kit 大鼠8羥基脫氧鳥苷 96T
MSH gamma 英文名稱: 促黑細胞激素γ抗體 0.2ml
phospho-ATF2 (Ser322) 英文名稱: 磷酸化活化復(fù)制因子2抗體 0.1ml
Anti-Amylin/FITC 熒光素標記兔抗糖尿病相關(guān)肽/胰島淀粉樣肽抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
TNFRSF19 Kit Mouse 小鼠 TNFRSF19 / TROY ELISA配對抗體 ELISA
TRIB1 英文名稱: G蛋白偶聯(lián)誘導(dǎo)蛋白2受體抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh P21/CDKN1A p21蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml
PIBF(progesterone induced blocking factor) 孕激素誘導(dǎo)阻斷因子(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
COLEC10(liver) 英文名稱: 凝集蛋白家族10抗體(肝) 0.2ml
Anti-CD57 CD57抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Anti-Phospho-FoxO4 (Ser193) /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠叉頭蛋白4抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-NKR/FITC 熒光素標記神經(jīng)激肽B受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh BTBD10 BTB/POZ結(jié)構(gòu)域蛋白10抗體 規(guī)格 0.2ml
ASPP1(apoptosis stimulating protein of P53 1) p53凋亡刺激蛋白1抗原 0.5mg
phospho-HMGN1(Ser20+Ser24) 英文名稱: 磷酸化高遷移率核小體結(jié)合蛋白1 0.1ml
Rhesus antibody Rh RISC/Serine carboxypeptidase 1 絲氨酸羧肽酶1抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-NKR/FITC 熒光素標記神經(jīng)激肽B受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經(jīng)過了遺傳改造。