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詳細(xì)介紹
小鼠骨髓瘤細(xì)胞；Fox-NY價(jià)格懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，如要高濃度可先離心1000rpm，5min后加入*培養(yǎng)基，輕輕吹勻后，分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會(huì)有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。
細(xì)胞名稱 小鼠骨髓瘤細(xì)胞；Fox-NY價(jià)格
形態(tài)特性 淋巴母細(xì)胞樣
品牌 懸浮生長
特征特性 該細(xì)胞來自骨髓瘤細(xì)胞系 NS-1；由于次黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（HPRT、HGPRT）和腺嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（APRT）缺陷導(dǎo)致該細(xì)胞對腺苷和鳥嘌呤的類似物抵抗。在氨基蝶呤、腺嘌呤和胸腺嘧啶存在的條件下，當(dāng)該細(xì)胞作為永生化細(xì)胞與Rb（8.12）易位的雌性小鼠的B細(xì)胞融合時(shí)，會(huì)產(chǎn)生Ig重鏈基因位點(diǎn)的陽性選擇；Ig重鏈基因的選擇可使雜交瘤細(xì)胞更穩(wěn)定地合成抗體。該細(xì)胞鼠痘病毒陰性。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
傳代方法
貼壁細(xì)胞: 對于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基，吸的越干凈越好，以免中和后加入的消化液，使強(qiáng)度減弱（或PBS洗1－3次）。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml，按此比例進(jìn)行消化，(根據(jù)經(jīng)驗(yàn))，晃動(dòng)使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘，鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后，輕輕振動(dòng)瓶底使細(xì)胞全部脫落，加入2-3ml*培養(yǎng)基后，輕輕吹打，使細(xì)胞基本成單個(gè)懸浮，然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
操作流程：
1.1 主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長至60%～70%融合時(shí)，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞，以0.25％胰酶消化成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100％，計(jì)算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d，繪制細(xì)胞生長曲線
Anti-PKC gamma/SCA14/FITC 熒光素標(biāo)記蛋白激酶C亞型G抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
human IgG (親和純化) 人IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 10mg
人類皰疹病毒8抗體 Anti-HHV8/ORF K2/vIL-6 0.1ml
Rabbit Anti-Monkey IgM 兔抗猴IgM 1mg
FAM76A 英文名稱： FAM76A蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-ROCK2(Thr249) 磷酸化Rho相關(guān)蛋白激酶2抗體 規(guī)格 0.1ml
human IgG (親和純化) 人IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 10mg
SAA3(Human serum amyloid A3) ELISA Kit 人血清淀粉樣蛋白A3Multi-class antibodies規(guī)格： 48T
Anti-MK2/MAPKK2 原活化蛋白激酶激酶2抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rhesus antibody Rh KCNC3/Kv3.3 離子通道蛋白Kv3.3抗體 規(guī)格 0.2ml
CORT ELISA Kit 大鼠皮質(zhì)酮/腎上腺酮 96T
PHEX 英文名稱： 維生素D低磷性佝僂病蛋白 0.2ml
CAPD2 英文名稱： 染色體相關(guān)蛋白2抗體 0.2ml
Anti-MK2/MAPKK2 原活化蛋白激酶激酶2抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
TmR2(GDNFR Beta;TRN-R;GFR-alpha-2;NTNR-2) 膠質(zhì)細(xì)胞系源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(多肽) 0.5mg
HLC3 英文名稱： 肺癌癌基因蛋白3抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh C1orf51 1號染色體開放閱讀框51抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-Phospho-EphA2 (Tyr594) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化酪氨酸蛋白激酶A2受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rhesus antibody Rh RSRC2 食道癌抑制生長蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-Phospho-MSK1 (Ser360)/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化有絲分裂原和應(yīng)激活化型蛋白激酶1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
EPO 小鼠促紅細(xì)胞生成素Multi-class antibodies規(guī)格： 48T
Anti-FGFR3/CD333 成纖維細(xì)胞生長因子受體3抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rhesus antibody Rh Mouse Anti-Rabbit IgM/Cy3 Cy3標(biāo)記的小鼠抗兔IgM 規(guī)格 0.1ml
ATF-1(Human activating transcription factor-1) ELISA Kit 人轉(zhuǎn)錄因子抗體-1 96T
STK33 英文名稱： 絲酸/蘇酸激酶33抗體 0.2ml
CDC37L1 英文名稱： 細(xì)胞分裂周期37樣蛋白1抗體 0.2ml
Anti-FGFR3/CD333 成纖維細(xì)胞生長因子受體3抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
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