詳細介紹
細胞名稱 小鼠胚胎細胞;RMD6培養(yǎng)
形態(tài)特性 上皮樣
品牌 貼壁生長
特征特性 該細胞屬專利保藏,其特征特性尚未公開。
培養(yǎng)條件 MEM-EBSS:
Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS
傳代方法 1:
3傳代,3-4天傳1次
傳代情況 C5
凍存條件 基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權限 未定
小鼠胚胎細胞;RMD6培養(yǎng)操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預熱,8~10倍體積)離心管內,稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內,在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù),按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液=(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔,計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,繪制細胞生長曲線
貼壁細胞: 對于貼壁細胞應先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,(根據(jù)經驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內,加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或實驗。
懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內,加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經過了遺傳改造。
Anti-TRT/FITC 熒光素標記端粒酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-Phospho-PKC gamma (Thr514)/FITC 熒光素標記磷酸化蛋白激酶C亞型G抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh ASB12 含錨蛋白重復序列-細胞因子信號抑制物盒蛋白家族12抗體 規(guī)格 0.2ml
Donkey Anti-rabbit IgG/Gold 膠體金標記的驢抗兔IgG 0.5ml
GJC1 英文名稱: 間隙連結蛋白31.9抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-Monkey IgM/PE-Cy3 PE-Cy3標記的兔抗猴IgM 規(guī)格 0.1ml
Anti-Phospho-PKC gamma (Thr514)/FITC 熒光素標記磷酸化蛋白激酶C亞型G抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
NE ELISA Kit 大鼠中性粒細胞彈性蛋白酶Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-TSARG3 生精細胞凋亡相關基因3抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh GHR 生長激素受體抗體 規(guī)格 0.1ml
Hyp(Mouse hydroxyproline) ELISA KIT 小鼠羥脯酸 96T
NKG2A 英文名稱: NK細胞受體2A抗體 0.2ml
AGXT2L2 英文名稱: AGXT2L2蛋白抗體 0.2ml
Anti-TSARG3 生精細胞凋亡相關基因3抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
SEP1(Human selenoprotein 1) ELISA Kit 人硒蛋白1 96T
phospho-Rb (Ser249) 英文名稱: 磷酸化視網膜母細胞瘤相關蛋白1抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh LMP7 低分子量蛋白7抗體 規(guī)格 0.2ml
pANCA(Human Perinuclear anti-neutrophil cytoplasmic antibody) ELISA Kit 人抗中性粒細胞核周抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
CD45 英文名稱: 白細胞共同抗原抗體 0.1ml
Anti-Inhibin Beta C 抑制素βC抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
cath-K ELISA Kit 大鼠組織蛋白酶KMulti-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-OX40/CD134/TNFRSF4 CD134抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Glucagon Receptor 胰高血糖素受體抗體 規(guī)格 0.1ml
CK17(Human cytokeratin 17) ELISA Kit 人細胞角蛋白17 96T
phospho-TrkB (Tyr705) 英文名稱: 磷酸化酪酸激酶B抗體 0.1ml
ABCB5 英文名稱: ATP結合蛋白家族5抗體 0.1ml
Anti-OX40/CD134/TNFRSF4 CD134抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml