詳細介紹
人關節(jié)軟骨細胞試劑盒懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經(jīng)過了遺傳改造。
產(chǎn)品名稱:人關節(jié)軟骨細胞試劑盒
規(guī)格:6次/盒
貼壁細胞: 對于貼壁細胞應先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,(根據(jù)經(jīng)驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù),按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液=(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔,計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,繪制細胞生長曲線
Anti-IL-1R I /FITC 熒光素標記白介素1受體Ⅰ抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-PP-2A/FITC 熒光素標記蛋白質(zhì)磷酸酶-2A抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh ARC/Arg3.1 ARC抗體 規(guī)格 0.1ml
Rabbit Anti-Mink IgG/Bio 生物素標記的兔抗水貂IgG 0.1ml
GPR77 英文名稱: G蛋白偶聯(lián)受體77抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-Mink IgG/Gold 膠體金標記的兔抗水貂IgG 規(guī)格 0.5ml
Anti-PP-2A/FITC 熒光素標記蛋白質(zhì)磷酸酶-2A抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
MC Ab(Human melanocyte antibody) ELISA Kit 人黑色素細胞抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-HIV gp120 艾滋病病毒抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh MDMX MDM2樣P53蛋白結合抗體 規(guī)格 0.2ml
PAMY(Human Pancreatic Amylase) ELISA Kit 人胰淀粉酶 96T
RNF113A 英文名稱: 環(huán)指蛋白113A抗體 0.1ml
C1orf167 英文名稱: 1號染色體開放閱讀框167抗體 0.2ml
Anti-HIV gp120 艾滋病病毒抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rabbit IgG Sepharose 4B 兔IgG親和層析柱 2ml柱床體積
TLK1 英文名稱: 調(diào)節(jié)染色體組裝激酶1抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh ODF3/CT135 /抗原135抗體 規(guī)格 0.2ml
Tetracycline/BSA 四環(huán)素偶聯(lián)血清白蛋白Multi-class antibodies規(guī)格: 2mg
CDKN2AIP 英文名稱: 鈣反應因子抗體 0.2ml
Anti-Phospho-p57 Kip2 (Thr310) 磷酸化周期蛋白依賴激酶抑制因子1C抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Anti-ADRB3/ Beta3-AR /RBITC 羅丹明標記腎上腺素能受體β3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-p-ERK1/p-MAPK-1/2 /FITC 熒光素標記磷酸化原活化蛋白激酶1/2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh CREB-H/CREB3L3 環(huán)腺苷酸應答元件結合蛋白H抗體 規(guī)格 0.2ml
DHT/BSA 雙氫睪酮偶聯(lián)血清白蛋白 1mg
KLK8 英文名稱: 激肽釋放酶8抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh UGP2 尿苷酰二磷酸葡萄糖焦磷化酶2抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-p-ERK1/p-MAPK-1/2 /FITC 熒光素標記磷酸化原活化蛋白激酶1/2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml