詳細(xì)介紹
細(xì)胞名稱(chēng) 大鼠垂體瘤細(xì)胞;GH3培養(yǎng)
形態(tài)特性 上皮樣
品牌 疏松貼壁,有漂浮的細(xì)胞簇
特征特性 GH3細(xì)胞系是由Tashjian AH等在1965年7月從一只7月齡的雌性Wistar-Furth大鼠的垂體腫瘤中分離建立的。GH3細(xì)胞系不是直接來(lái)源于GH1細(xì)胞系的克隆,而是從原代培養(yǎng)的GH1細(xì)胞在大鼠身上傳代兩次形成的腫瘤中建立的。上皮樣的GH3細(xì)胞比GH1分泌更高水平的生長(zhǎng)激素,也可產(chǎn)生催乳素。對(duì)調(diào)控GH3細(xì)胞分泌蛋白類(lèi)激素的研究表明,氫化可可以刺激生長(zhǎng)激素的分泌、抑制催乳素的產(chǎn)生。
培養(yǎng)條件 F10:
Ham's F10 Nutrie?
大鼠垂體瘤細(xì)胞;GH3培養(yǎng)操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開(kāi),吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長(zhǎng)至60%~70%融合時(shí),用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中,每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計(jì)算貼壁率。
1.6 生長(zhǎng)曲線 取指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔,計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線
貼壁細(xì)胞: 對(duì)于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強(qiáng)度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進(jìn)行消化,(根據(jù)經(jīng)驗(yàn)),晃動(dòng)使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見(jiàn)細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動(dòng)瓶底使細(xì)胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細(xì)胞基本成單個(gè)懸浮,然后分置其它無(wú)菌培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語(yǔ)的定義會(huì)有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過(guò)了遺傳改造。
Anti-HEV/FITC 熒光素標(biāo)記戊型肝炎病毒抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-PHD3 /FITC 熒光素標(biāo)記脯氨酸羥化酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh AUTS2 孤獨(dú)癥易感基因2蛋白抗體(自閉癥相關(guān)蛋白1) 規(guī)格 0.2ml
ShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin)-(Ala22) ??窠?jīng)毒素(35肽) 0.1mg
GRASP65 英文名稱(chēng): 高爾基體外周膜蛋白p65抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit anti-mouse Kappa light chain/HRP 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的兔抗小鼠k鏈 規(guī)格 0.1ml
Anti-PHD3 /FITC 熒光素標(biāo)記脯氨酸羥化酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
MAC(Human membrane attack complex) ELISA Kit 人膜攻擊復(fù)合物Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-L-Selectin/CD62L L選擇素抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh HCCR1/BRI3BP 原基因1/bri3結(jié)合蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
Hp-IgG(Human Helicobacter pylori IgG ) ELISA Kit 人幽門(mén)螺旋菌IgG 96T
PCNA 英文名稱(chēng): 增殖細(xì)胞核抗原抗體 0.1ml
Blood Group Lewis b 英文名稱(chēng): 粘蛋白/巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶3抗體 0.2ml
Anti-L-Selectin/CD62L L選擇素抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rabbit Anti-rat IgG/APC APC標(biāo)記的兔抗大鼠IgG 0.1ml
GIMAP5 英文名稱(chēng): GTP酶IMAP家族成員5抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh APC6/CDC16 細(xì)胞分裂周期蛋白16抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-IL-17RD/FITC 熒光素標(biāo)記白介素17受體D抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-human IgM/HRP 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的兔抗人IgM 規(guī)格 0.1ml
Anti-Rad52/FITC 熒光素標(biāo)記Rad52抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-Phospho-PKC gamma (Thr674) /FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化蛋白激酶C亞型G抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-Human IgG(monoclonal antibody) 鼠抗人IgG單克隆抗體 (親和層析純化)Multi-class antibodies規(guī)格: 1mg
人基因/bri3結(jié)合蛋白抗體 Anti-HCCR-1 0.1ml
Dog IgM/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗犬IgM抗體 0.1ml
FAM113A 英文名稱(chēng): FAM113A蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-RPS6KB1(Ser441+Thr444) 磷酸化核糖體S6蛋白激酶抗體 規(guī)格 0.1ml
Anti-Human IgG(monoclonal antibody) 鼠抗人IgG單克隆抗體 (親和層析純化)Multi-class antibodies規(guī)格: 1mg