詳細介紹
細胞名稱 正常大鼠腎細胞;NRK培養(yǎng)
形態(tài)特性 上皮細胞樣
品牌 貼壁生長
特征特性 NRK細胞系衍生自正常鼠腎組織,能在多種培養(yǎng)基中常規(guī)傳化。該細胞用于細胞毒性試驗、生長效力測定,是藥物評估的首細胞系。
培養(yǎng)條件 DMEM-H:
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
傳代方法 1:
3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C57
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR STR鑒定
同工酶
染色?
正常大鼠腎細胞;NRK培養(yǎng)貼壁細胞: 對于貼壁細胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,(根據(jù)經(jīng)驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù),按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液=(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔,計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,繪制細胞生長曲線
Anti-HSD11B2/HSD2 /FITC 熒光素標(biāo)記羥基類固醇脫氫酶11β2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-Tubulin- Alpha/FITC 熒光素標(biāo)記微管蛋白α抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh 5-HTR2A 5-羥色胺受體2A抗體 規(guī)格 0.1ml
Mouse Anti-rat IgG/Bio 生物素標(biāo)記的小鼠抗大鼠IgG 0.1ml
GRK6 英文名稱: G蛋白偶聯(lián)受體激酶6抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh PTHrP/PTHLH 甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml
Anti-Tubulin- Alpha/FITC 熒光素標(biāo)記微管蛋白α抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
LTB4(Human Leukotriene B4) ELISA Kit 人白三烯B4Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-MMP-20 基質(zhì)金屬蛋白酶20抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh Integrin β2/CD18/LFA-1 整合素β2抗體 規(guī)格 0.1ml
VEGF-D ELISA Kit 大鼠血管內(nèi)皮細胞生長因子D 96T
PITX2 英文名稱: 成對樣同源結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)錄因子2抗體 0.2ml
Collagen II 英文名稱: Ⅱ型膠原蛋白抗體 0.1ml
Anti-MMP-20 基質(zhì)金屬蛋白酶20抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rabbit Anti-pig IgG/AP 堿性磷酸酶(AP)標(biāo)記的兔抗豬IgG 0.1ml
Cobra poison Protein 英文名稱: 眼鏡蛇蛇毒蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Apollon/BIRC6 Apollon凋亡抑制蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-Phospho-IKK alpha/beta (Ser176/Ser180) /FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化核因子κB激酶alpha/beta抑制劑抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit anti-MG IgG/Gold 膠體金標(biāo)記的兔抗長爪沙鼠IgG 規(guī)格 0.5ml
Anti-pro-caspase3/FITC 熒光素標(biāo)記半胱天冬酶-3酶原抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
E2(Mouse Estradiol)ELISA Kit 小鼠雌二醇Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-COX-1/FITC 熒光素標(biāo)記前列腺素氧化環(huán)化酶1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Desmoglein 3/DSG3 橋粒芯蛋白3抗體 規(guī)格 0.1ml
Dog IgM/RBITC 羅丹明標(biāo)記狗IgM 0.3ml
Lxn/Latexin 英文名稱: 羧肽酶抑制劑抗體 0.1ml
呋喃西林代謝物檢測試劑盒 96孔/盒 各種動物組織/水產(chǎn)/蜂蜜
Anti-COX-1/FITC 熒光素標(biāo)記前列腺素氧化環(huán)化酶1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經(jīng)過了遺傳改造。