詳細(xì)介紹
細(xì)胞名稱 犬腎細(xì)胞系/IgR;MDCK/IgR培養(yǎng)
形態(tài)特性 上皮細(xì)胞樣
品牌 貼壁生長
特征特性 該細(xì)胞為MDCK細(xì)胞的克隆系。
培養(yǎng)條件 MEM-EBSS:
Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS
傳代方法 1:
3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C6
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 陰性
STR
同工酶 同工酶鑒定
染色體
使用權(quán)限 A類
犬腎細(xì)胞系/IgR;MDCK/IgR培養(yǎng)操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長至60%~70%融合時(shí),用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計(jì)算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔,計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長曲線
貼壁細(xì)胞: 對(duì)于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強(qiáng)度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進(jìn)行消化,(根據(jù)經(jīng)驗(yàn)),晃動(dòng)使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動(dòng)瓶底使細(xì)胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細(xì)胞基本成單個(gè)懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會(huì)有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。
Anti-EGFL7/FITC 熒光素標(biāo)記抗脈管發(fā)育(組裝)蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-MMP-26/FITC 熒光素標(biāo)記基質(zhì)金屬蛋白酶-26抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh C21orf58 21號(hào)染色體開放閱讀框58抗體 規(guī)格 0.2ml
Tubulin- Beta 微管蛋白(抗原) 0.5mg
H9N1 Hemagglutinin 英文名稱: A型流感病毒H9N1血凝素型抗體 1ml
Rhesus antibody Rh S100B/S100 beta S100B蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-MMP-26/FITC 熒光素標(biāo)記基質(zhì)金屬蛋白酶-26抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Lgr5/GPR49 腸上皮干細(xì)胞蛋白(多肽)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
Anti-AGEs 晚期糖基化終末產(chǎn)物抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh Phospho-CaMKII (Thr286) 磷酸化鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2α抗體 規(guī)格 0.1ml
Avidin阻擋劑 10ml Sigma原料
VANGL2 英文名稱: 神經(jīng)管畸形相關(guān)蛋白VANGL2抗體 0.2ml
DMAP1 英文名稱: DNA甲基轉(zhuǎn)移酶相關(guān)蛋白1抗體 0.2ml
Anti-AGEs 晚期糖基化終末產(chǎn)物抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rabbit Anti-mouse IgG/Cy7 Cy7標(biāo)記的兔抗小鼠IgG 0.1ml
G protein alpha S 英文名稱: G蛋白αS抗體(鳥嘌呤核苷酸結(jié)合蛋白Gα s) 0.2ml
Rhesus antibody Rh ANKRD53 錨蛋白重復(fù)域53抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-Insulin/FITC 熒光素標(biāo)記標(biāo)記胰島素抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-human IgG F(ab')2/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗人IgG F(ab')2 規(guī)格 0.1ml
Anti-RUNX1/AML1/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠急性髓細(xì)胞白血病1蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-TRT/FITC 熒光素標(biāo)記端粒酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-Phospho-PKC gamma (Thr514)/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化蛋白激酶C亞型G抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh ASB12 含錨蛋白重復(fù)序列-細(xì)胞因子信號(hào)抑制物盒蛋白家族12抗體 規(guī)格 0.2ml
Donkey Anti-rabbit IgG/Gold 膠體金標(biāo)記的驢抗兔IgG 0.5ml
GJC1 英文名稱: 間隙連結(jié)蛋白31.9抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-Monkey IgM/PE-Cy3 PE-Cy3標(biāo)記的兔抗猴IgM 規(guī)格 0.1ml
Anti-Phospho-PKC gamma (Thr514)/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化蛋白激酶C亞型G抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml