詳細(xì)介紹
細(xì)胞名稱 小耳豬肺細(xì)胞;SEP-L1培養(yǎng)
形態(tài)特性 成纖維細(xì)胞樣
品牌 貼壁生長
特征特性 該細(xì)胞系來源于一雌性小耳豬的皮膚組織。1988年由中國科學(xué)院昆明細(xì)胞庫建立。
培養(yǎng)條件 M-199:
with Earle's Balanced Salts Solution (EBSS) 15%NBS
傳代方法 1:
2傳代;3-4天一次
傳代情況 P2
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 熒光法(-)
STR -
同工酶
染色體
使用權(quán)限 B類
小耳豬肺細(xì)胞;SEP-L1培養(yǎng)操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔,計數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長曲線
貼壁細(xì)胞: 對于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強(qiáng)度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進(jìn)行消化,(根據(jù)經(jīng)驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細(xì)胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細(xì)胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。
Anti-Cyclin H/FITC 熒光素標(biāo)記周期素H抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-LILRB3/CD85a/PirB/FITC 熒光素標(biāo)記白細(xì)胞免疫球蛋白樣受體-B抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Caspase 4/Caspase 11 半胱胺酸蛋白酶4/11抗體 規(guī)格 0.2ml
ELK1 細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子ELK1抗原 0.5mg
HCCS 英文名稱: 全細(xì)胞色素C合成酶抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Sin3b 轉(zhuǎn)錄抑制蛋白Sin3b抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-LILRB3/CD85a/PirB/FITC 熒光素標(biāo)記白細(xì)胞免疫球蛋白樣受體-B抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Ki-67 Anti-gen Ki-67 Antigen(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
Anti-CD122/IL-2RB 白介素2受體β鏈抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh PAK4 小鼠抗p21激活激酶4抗體 規(guī)格 0.2ml
PCSK9 Kit Rat 大鼠 PCSK9 ELISA配對抗體 ELISA
TMEM132A 英文名稱: 跨膜蛋白132A抗體 0.2ml
CNTNAP3 英文名稱: 接觸蛋白相關(guān)蛋白3抗體 0.1ml
Anti-CD122/IL-2RB 白介素2受體β鏈抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-Mink IgG/PE-CY5 PE-CY5標(biāo)記的兔抗水貂IgG 0.1ml
GADL1 英文名稱: 谷酸脫羧酶樣蛋白1抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh ARHGAP20 Rho GTP酶激活蛋白20抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-IKB alpha(phospho S32 + S36)/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化KB抑制蛋白α抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-Mink IgG/RBITC 羅丹明標(biāo)記的兔抗水貂IgG 規(guī)格 0.1ml
Anti-Phospho-PLK1 (Thr210)/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化絲/蘇氨酸蛋白激酶Plk1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-CYP8A1/PTGIS/FITC 熒光素標(biāo)記前列環(huán)素合成酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-HRH3/GPCR97/FITC 熒光素標(biāo)記組織胺H3受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh CARPX/CA10 碳酸酐酶相關(guān)蛋白抗體(腦蛋白15) 規(guī)格 0.1ml
E2F6 轉(zhuǎn)錄因子E2F-6抗原 0.5mg
HEMK2 英文名稱: Hemk甲基轉(zhuǎn)移酶家族2號蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Shrimp tropomyosin 南美白對蝦過敏原蛋白(蝦原肌球蛋白)抗體 規(guī)格 0.1ml
Anti-HRH3/GPCR97/FITC 熒光素標(biāo)記組織胺H3受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml