詳細介紹
細胞名稱 恒河猴腎細胞;LLC-MK2培養(yǎng)
形態(tài)特性 上皮細胞
品牌 貼壁生長
特征特性 LLC-MK2細胞株源自六只成年綠猴的腎細胞懸液。 據(jù)報道這個細胞對很多病毒敏感,包括腸道病毒、鼻病毒、粘病毒和痘病毒家族中的成員。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%
傳代方法 消化3-5分鐘。1:
2。3天內(nèi)可長滿。
傳代情況 PN5
凍存條件 *培養(yǎng)基+8%DMSO
支原體檢測 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
恒河猴腎細胞;LLC-MK2培養(yǎng)貼壁細胞: 對于貼壁細胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,(根據(jù)經(jīng)驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù),按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液=(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔,計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,繪制細胞生長曲線
Anti-factor VIII/FITC 熒光素標記第八因子相關(guān)抗原抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-N-cadherin /FITC 熒光素標記N-鈣粘附分子抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh C16orf7/ATP-BL 16號染色體開放閱讀框7抗體 規(guī)格 0.2ml
PPAR-delta (peroxisome proliferator-activated receptor) D型-過氧化酶活化增生受體(多肽) 0.5mg
HDC 英文名稱: L-組酸脫羧酶抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh RNF8 環(huán)指蛋白8抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-N-cadherin /FITC 熒光素標記N-鈣粘附分子抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Insulin Receptor(ISR) 胰島素受體(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
Anti-CD23/Fc EpsilonR II CD23抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh PALB2 癌易感基因相關(guān)蛋白2 規(guī)格 0.1ml
CEACAM5 Kit Human 人 CEACAM5 / CD66e ELISA配對抗體 ELISA
TEF3 英文名稱: 轉(zhuǎn)錄增強因子TEF3抗體 0.2ml
CPA6 英文名稱: 胰羧肽酶A6抗體 0.2ml
Anti-CD23/Fc EpsilonR II CD23抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-human sIgA/PE-CY5 PE-CY5標記的兔抗人分泌型IgA 0.1ml
FAF1 英文名稱: Fas相關(guān)1因子抗體 0.1ml
表皮生長因子受體抗體 Anti-EGF-R 0.1ml
anti-PDI/FITC 熒光素標記蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-TCF3/E47/E2A(Thr355) 磷酸化轉(zhuǎn)錄因子3抗體 規(guī)格 0.1ml
Avidin/FITC 熒光素標記親合素Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
IGFBP-2 ELISA Kit 大鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白2Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-Protein C/FITC 熒光素標記APC活化蛋白C抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh FAM76B FAM76B蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
EGF(Human Epidermal growth factor) ELISA Kit 人表皮生長因子 96T
Phospho-MEK1 + MEK2 (Ser222) 英文名稱: 磷酸化原活化蛋白激酶激酶1/2抗體 0.1ml
ACSL1 英文名稱: 長鏈脂肪酸輔酶A連接酶1/2抗體 0.2ml
Anti-Protein C/FITC 熒光素標記APC活化蛋白C抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經(jīng)過了遺傳改造。