詳細(xì)介紹
操作程序:
由您提供該實驗中目的基因的相關(guān)資料(如:基因名稱、序列等信息),我們共同探討服務(wù)的可能性和技術(shù)路線;
商定服務(wù)收費(fèi)、付款方式、服務(wù)期限等,并簽定技術(shù)服務(wù)合同。
有您提供實驗所需的足夠量的實驗樣本(100mg組織或107個細(xì)胞),本公司不接受您提供的RNA樣本
PCR所需引物/探針(如果用探針法),可以由您自己提供,也可以委托本公司設(shè)計合成(費(fèi)用另計)。如果由您自己提供,必須是PAGE純化的高質(zhì)量的干粉,本公司不接受已溶解的引物/探針。
我們進(jìn)行RNA抽提、RNA定量、反轉(zhuǎn)錄、Real-time PCR擴(kuò)增、數(shù)據(jù)分析。
提供實驗報告,包括實驗過程、所用儀器試劑、擴(kuò)增曲線、標(biāo)準(zhǔn)曲線和相關(guān)分析數(shù)據(jù)等。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
48T 0.2PCR管 | YS-01P6394 |
自備物品:
15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標(biāo)板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標(biāo)儀:用于微量樣品比色分析
儲存條件:
14℃或-20℃
準(zhǔn)備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
定量PCR方法:
a、競爭法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競爭性模板。在同一反應(yīng)管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴(kuò)增(其中一個引物為熒光標(biāo)記)。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開,分別測定熒光強(qiáng)度,根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物,內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記,下游引物不標(biāo)記。在模板擴(kuò)增的同時,內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中,由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同,二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強(qiáng)度,以內(nèi)標(biāo)為對照定量待檢測模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或等標(biāo)記引物,擴(kuò)增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合,再加入抗di高辛或酶標(biāo)抗體-辣根過氧化物酶結(jié)合物,最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR-ELISA法只是定性實驗,若加入內(nèi)標(biāo),作出標(biāo)準(zhǔn)曲線,也可實現(xiàn)定量檢測目的。
使用方法:
一、樣品采集:
1、食品樣品:樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗要求進(jìn)行。
2、血液樣品:用抽取受檢者靜脈血2mL,注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管,立即混勻。
3、糞便樣品:取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品:取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
二、稀釋 PCR 陽性對照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照。
2. 標(biāo)記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液(最好用帶芯槍頭,下同)。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
6. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
乙酰乙甲氧乙酯 96%4--1-甲基-1H-吡唑 97%小鼠白介-5(IL-5)免疫試劑盒
石墨 99.95% metals basis4--1H-咪唑 97%小鼠白介4(IL-4)免疫試劑盒
石墨 99%,40nm1-(2-乙基)-2-甲基-5-硝基-1H-咪唑 98%小鼠白介35(IL-35)免疫試劑盒
石墨 CP,99.85%1-甲基-D-色氨 96%小鼠白介33(IL-33)免疫試劑盒
石墨 D50<400nm,99.95%2-磺酰 98%小鼠白介31(IL-31)免疫試劑盒
石墨 99.95%,8000目(S)-2-硝基-6,7-二氫-5H-咪唑并[2,1-b][1,3]惡-6- 98%小鼠白介3(IL-3)免疫試劑盒
鐿 99.9%,塊狀吡唑-3-甲酰 97%小鼠白介2受體β(IL2rb/CD122)免疫試劑盒
鐿粉 99.9%1H-吡唑-3- 98%小鼠白介2可溶性受體α鏈(sIL-2Rα/CD25)免疫試劑盒
茜紅 AR,≥80.0%(HPLC)2,2,2-三 98%小鼠白介29(IL-29)免疫試劑盒
茜黃GG IND二叔戊酰 98%小鼠白介28A(IL-28A)免疫試劑盒
茜黃R AR雙(2,2,6,6,-四甲基-3,5-庚二酮)銅 99%小鼠白介28(IL-28)免疫試劑盒
藍(lán)6B IND(2,2,6,6-四甲基-3,5-庚二酮)釔 99%小鼠白介27(IL-27)免疫試劑盒
天青I Biological stain烯 AR,>99%(GC),包含180-200 ppm MEHQ 穩(wěn)定劑小鼠白介25(IL25/C19orf10)免疫試劑盒
天青I 94%烯, GR,>99.5%(GC)小鼠白介23(IL-23)免疫試劑盒
天青Ⅱ Biological stain烯丁酯 AR,99%小鼠白介22(IL-22)免疫試劑盒
雞源性核酸檢測試劑盒48T 0.2PCR管小鼠抗心肌抗體(AMA)ELISA試劑盒,3-鄰二甲抑制蛋白結(jié)構(gòu)域蛋白4抗體
小鼠環(huán)磷鳥(cGMP)ELISA試劑盒,1-Boc-4-溴甲基哌啶雌二抗體
大鼠繆勒管抑制物質(zhì)/抗繆勒管激(MIS/AMH)ELISA試劑盒,1-Boc-4-溴甲基哌啶淀粉樣蛋白β前體樣蛋白2抗體
大鼠鐵蛋白(FE)ELISA試劑盒,3-溴甲淀粉樣蛋白β前體樣蛋白1抗體
大鼠可溶性CD86(B7-2/sCD86)ELISA試劑盒,3-溴甲轉(zhuǎn)錄激活蛋白crsp70抗體
大鼠第八因子相關(guān)抗原(FⅧAg)ELISA試劑盒,3-溴甲卵巢、胎盤、前列腺、蛋白22抗體
大鼠肌紅蛋白(MYO/MB)ELISA試劑盒,4-吡啶錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白33B抗體
豬熱休克蛋白40(HSP-40)ELISA試劑盒,4-吡啶載脂蛋白C3抗體