操作程序:
由您提供該實(shí)驗(yàn)中目的基因的相關(guān)資料(如:基因名稱、序列等信息),我們共同探討服務(wù)的可能性和技術(shù)路線;
商定服務(wù)收費(fèi)、付款方式、服務(wù)期限等,并簽定技術(shù)服務(wù)合同。
有您提供實(shí)驗(yàn)所需的足夠量的實(shí)驗(yàn)樣本(100mg組織或107個(gè)細(xì)胞),本公司不接受您提供的RNA樣本
PCR所需引物/探針(如果用探針?lè)ǎ梢杂赡约禾峁?,也可以委托本公司設(shè)計(jì)合成(費(fèi)用另計(jì))。如果由您自己提供,必須是PAGE純化的高質(zhì)量的干粉,本公司不接受已溶解的引物/探針。
我們進(jìn)行RNA抽提、RNA定量、反轉(zhuǎn)錄、Real-time PCR擴(kuò)增、數(shù)據(jù)分析。
提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告,包括實(shí)驗(yàn)過(guò)程、所用儀器試劑、擴(kuò)增曲線、標(biāo)準(zhǔn)曲線和相關(guān)分析數(shù)據(jù)等。
自備物品:
15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標(biāo)板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標(biāo)儀:用于微量樣品比色分析
儲(chǔ)存條件:
14℃或-20℃
準(zhǔn)備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產(chǎn)品說(shuō)明書 1份
定量PCR方法:
a、競(jìng)爭(zhēng)法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個(gè)新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競(jìng)爭(zhēng)性模板。在同一反應(yīng)管中,待測(cè)樣品與競(jìng)爭(zhēng)模板用同一對(duì)引物同時(shí)擴(kuò)增(其中一個(gè)引物為熒光標(biāo)記)。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,競(jìng)爭(zhēng)性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個(gè)片段,而待測(cè)模板不被酶切,可通過(guò)電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開(kāi),分別測(cè)定熒光強(qiáng)度,根據(jù)已知模板推測(cè)未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物,內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記,下游引物不標(biāo)記。在模板擴(kuò)增的同時(shí),內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中,由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長(zhǎng)度不同,二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開(kāi)來(lái),分別測(cè)定其熒光強(qiáng)度,以內(nèi)標(biāo)為對(duì)照定量待檢測(cè)模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或等標(biāo)記引物,擴(kuò)增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合,再加入抗di高辛或酶標(biāo)抗體-辣根過(guò)氧化物酶結(jié)合物,最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR-ELISA法只是定性實(shí)驗(yàn),若加入內(nèi)標(biāo),作出標(biāo)準(zhǔn)曲線,也可實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)目的。
使用方法:
一、樣品采集:
1、食品樣品:樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗(yàn)要求進(jìn)行。
2、血液樣品:用抽取受檢者靜脈血2mL,注入無(wú)菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管,立即混勻。
3、糞便樣品:取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品:取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
二、稀釋 PCR 陽(yáng)性對(duì)照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照,只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽(yáng)性對(duì)照。
2. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液(最好用帶芯槍頭,下同)。
4. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用
6. 換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
2-苯基丁酰氯 98%黃磷 CP(劇品)小鼠纖連蛋白(FN)免疫試劑盒
鹽普魯卡因 分析標(biāo)準(zhǔn)品黃磷 GR(劇品)小鼠細(xì)小病(PV)抗體(IgG)免疫試劑盒
溴磷 分析標(biāo)準(zhǔn)品過(guò)氧乙 AR,18-20%小鼠周期D3(Cyclin-D3)免疫試劑盒
D-氨基葡萄糖-6-硫鹽 99%過(guò)氧乙 21-25%小鼠周期D2(Cyclin-D2)免疫試劑盒
根皮,二水 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99%過(guò)氧乙 26-30%小鼠周期D1(Cyclin-D1)免疫試劑盒
三(基)伍甲基環(huán)戊二烯基釕(II)六磷 96%過(guò)氧乙 31-35%小鼠因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子3(SOCS-3)免疫試劑盒
聚乙烯 18-88 Mw ~130,000過(guò)氧乙 36-40%小鼠因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子1(SOCS-1)免疫試劑盒
聚乙烯 20-98 Mw ~125,000過(guò)氧乙 41-45%小鼠外信號(hào)調(diào)節(jié)激(ERK)免疫試劑盒
聚乙烯 4-98 Mw ~27,000過(guò)氧乙 46-50%小鼠色C(Cyt-C)免疫試劑盒
五氯 99%,用于植物培養(yǎng)過(guò)氧乙 高純度,醫(yī)用級(jí),5%(1Gal/PE)小鼠角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)免疫試劑盒
五氯標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.1mg/ml過(guò)氧乙 15-17%小鼠角蛋白18-M65(CK 18-M65)免疫試劑盒
五氯 分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%發(fā)煙硫 AR小鼠角蛋白18-M30(CK 18-M30)免疫試劑盒
五氯標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=2%發(fā)煙硫 65%小鼠間粘附分子3(ICAM-3/CD50)免疫試劑盒
五氯標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=2%結(jié)晶四氯化錫 AR,99.0% 小鼠間粘附分子2(ICAM-2/CD102)免疫試劑盒
五氯 97%結(jié)晶四氯化錫 99.995% metals basis小鼠間粘附分子1(ICAM-1/CD54)免疫試劑盒
霍亂弧菌核酸檢測(cè)試劑盒48T 0.1PCR管Ⅱ型膠原螺旋肽(HELIX-Ⅱ)ELISA試劑盒--動(dòng)物,人4,7-二溴-2,1,3-苯并噻二唑磷化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體
輪狀?。?/span>RV)IgM ELISA試劑盒--動(dòng)物,人(S)-(+)-2-氨基-4-溴丁氫鹽磷化活化轉(zhuǎn)錄因子4抗體
戊型肝炎病IgM(HEV-IgM)ELISA試劑盒--動(dòng)物,人(S)-(+)-2-氨基-4-溴丁氫鹽磷化雄激受體抗體
改良BPLS瓊脂Zinquin Ethyl Ester磷化雄激受體抗體
吖啶黃每支添加于225ml HB4150、HB4192中(SN、GB標(biāo)準(zhǔn))無(wú)水氘代乙(Isotopic)磷化蛋白激AKT1,2,3抗體
L-羥脯氨甲酯鹽鹽二(乙酰酮)鉑(II)磷化蛋白激B抗體
DL-正亮氨二(乙酰酮)鉑(II)磷化活化復(fù)制因子2抗體
人補(bǔ)體7(C7)ELISA試劑盒,3-甲基-4-羥基苯甲凋亡相關(guān)蛋白3抗體