詳細(xì)介紹
原理是由一對引物介導(dǎo),能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 分類 |
多子小瓜蟲PCR檢測試劑盒供應(yīng)商 | Ichthyophthirius multifiisPCR | PCR檢測試劑盒 |
PCR基本操作:
?
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認(rèn)實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程,最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴(kuò)增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對定量)和定性分析。
主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR
多子小瓜蟲PCR檢測試劑盒供應(yīng)商Cefprozil (Z)-Isomer20mg/支MUSK 肌肉骨骼受體酪激酶體ELISA Kit for Protease Activated Receptor 2 (PAR2)
20mg/支connexin-30 間隙連接蛋白30體ELISA Kit for Protease Activated Receptor 2 (PAR2)
Ceftiofur Sodium20mg/支SGK3 絲/蘇蛋白激酶Sgk3體ELISA Kit for Methemoglobin Reductase (MHBR)
Cefoxitin20mg/支BAZ/ACF1 區(qū)結(jié)構(gòu)域相鄰鋅指蛋白1A體ELISA Kit for Complement Component 3 (C3)
Cefpiramide20mg/支FAS/Apo-1/CD95 載脂蛋白1體ELISA Kit for Complement Component 3 (C3)
Ceftazidime, Delta-3-Isomer20mg/支CPE 胰羧肽酶E體ELISA Kit for Complement Component 3 (C3)
Ceftazidime Pentahydrate20mg/支Myotilin 肌收縮蛋白MYOT體ELISA Kit for Neutrophil Cytosolic Factor 2 (NCF2)
Ceftizoxime20mg/支PMCA 細(xì)胞膜鈣轉(zhuǎn)運ATP酶體ELISA Kit for Neutrophil Cytosolic Factor 2 (NCF2)BS97%10gFcγRIIaHPLC含量Anti-ARAlpha1/ADRA1B alpha 1腎上能受體體Anti-ARAlpha1/ADRA1B alpha 1腎上能受體體48T/96T99%5gBBS
高純,95%97%100gSTIM1含量測定Anti-MASH1 神經(jīng)母細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)移因子體Anti-MASH1 神經(jīng)母細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)移因子體48T/96T98%25gBBT
高純,95%98%25gSTIM2供HPLC法Anti-ASIC1/BNaC2 敏感離子通道1體Anti-ASIC1/BNaC2 敏感離子通道1體48T/96T98%5gPF4
PCR反應(yīng)特點
(1) 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個細(xì)菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。