詳細介紹
細胞名稱 Asp2人胚胎腎細胞轉化細胞;FC33培養(yǎng)
形態(tài)特性 上皮樣;多角
品牌 貼壁生長
特征特性 帶有編碼多組氨酸的Asp-2基因轉染293細胞,用于阿爾茨海默病的研究;表達Asp-2基因。
培養(yǎng)條件 DMEM-H:
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS;250ug/ml G418
傳代方法 1:
3傳代;3~4天1次。
傳代情況 不詳
凍存條件 基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養(yǎng)法(-)
STR
同工酶
染色體
使用權限 A類
Asp2人胚胎腎細胞轉化細胞;FC33培養(yǎng)操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù),按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液=(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔,計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,繪制細胞生長曲線
Asp2人胚胎腎細胞轉化細胞;FC33培養(yǎng)貼壁細胞: 對于貼壁細胞應先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,(根據(jù)經(jīng)驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或實驗。
Asp2人胚胎腎細胞轉化細胞;FC33培養(yǎng)懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經(jīng)過了遺傳改造。
INS ELISA Kit 大鼠胰島素Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-Na,K-ATPase alpha-1 (Phospho Ser23) /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠磷酸化鈉鉀ATP酶蛋白a1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh FABPB 腦型脂肪酸結合蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
pACCase ELISA Kit 大鼠磷酸化乙酰輔酶A羧化酶 96T
CCL3 英文名稱: 巨噬細胞炎癥因子1α抗體 MIP-1α 0.1ml
AP2 beta 英文名稱: 銜接蛋白β抗體 0.1ml
Anti-Na,K-ATPase alpha-1 (Phospho Ser23) /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠磷酸化鈉鉀ATP酶蛋白a1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
VD3 ELISA Kit 大鼠維生素D3Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-ADRB2/FITC 熒光素標記腎上腺素能受體β2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh FCHSD1 FCHSD1蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
Mouse trypsin ELISA Kit 小鼠胰蛋白酶 96T
MAP1LC3A 英文名稱: 自噬微管相關蛋白輕鏈3抗體 0.1ml
ADAM12 英文名稱: 去整合素樣金屬蛋白酶12 0.2ml
Anti-ADRB2/FITC 熒光素標記腎上腺素能受體β2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
人毛球族同族體3(TRB-3)ELISA試劑盒人96T0.156-10 ng/mL大鼠激肽釋放酶6(KLK6)ELISA試劑盒,英文名:KLK6 ELISA KiISA Kit for Human Plaet-activating factor acetylhydrolase IB subunit gamma大鼠白介素2(IL-2)ELISA試劑盒,英文名:IL-2 ELISA Kit人磷脂酰肌醇聚糖合成類蛋白F(PIG-F)ELISA試劑盒人96T0.312-20 ng/mL大鼠FMS樣酪氨酸激酶3配體(Flt3L)ELISA試劑盒,英文名:Flt3L ELISA KiISA Kit for Human Ras-related protein 1(Semenogelin-1)ELISA試劑盒人96T1.56-100 ng/mL大鼠胰島素樣生長因子結合蛋白5(IGFBP5)ELISA試劑盒,英文名:IGFBP5 ELISA KiISA Kit for Human Semaphorin-3A大鼠吻素1(KISS1)ELISA試劑盒,英文名:KISS1 ELISA Kit人分泌型卷曲蛋白1 (FRP-1)ELISA試劑盒人96T0.78-50 ng/mL大鼠色胺酸羥化酶1(TPH1)ELISA試劑盒,英文名:TPH1 ELISA Kit
人基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)ELISA試劑盒人96T0.312-20 ng/mL大鼠二價金屬轉運蛋白1(DMT1)ELISA試劑盒,英文名:DMT1 ELISA KiISA Kit for Human E-selectin大鼠淋巴毒素β(LTβ)ELISA試劑盒,英文名:LTβ ELISA KiISA Kit for Human Thyroid hormone receptor alpha大鼠谷光甘肽合成酶(GSS)ELISA試劑盒,英文名:GSS ELISA KiISA Kit for Human Versican core protein大鼠丙酮酸脫氫酶激酶同工酶4(PDK4)ELISA試劑盒,英文名:PDK4 ELISA Kit大鼠B-淋巴細胞趨化因子1(BLC1)ELISA試劑盒,英文名:BLC1 ELISA KiISA Kit for Human Pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide type I receptor小鼠腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體受體4(TRAIL-R4)ELISA試劑盒,英文名:TRAIL-R4 ELISA KiISA Kit for Human Arachidonate 12-lipoxygenase, 12S-type小鼠纖溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)ELISA試劑盒,英文名:PAI-1 ELISA Kit
兔抗IgG血清 0.5ml 國產(chǎn)
WFS1 英文名稱: Wolfram綜合征蛋白1抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-c-Jun(Thr91) 磷酸化原癌基因c-Jun抗體 規(guī)格 0.1ml
HO-1/HSP32 (Hemeo xygenase 1) 血紅素氧合酶-1/熱休克蛋白-32抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
DRD5 英文名稱: 多巴胺受體D5抗體 0.1ml
Anti-AAT α-1抗胰蛋白酶抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Asp2人胚胎腎細胞轉化細胞;FC33培養(yǎng)Anti-TGF- Beta3/FITC 熒光素標記轉移生長因子–β3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
NIK,NF-kappaB-Inducing Kinase NFkB誘導的激酶(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
P物質(zhì)抗體 Anti-SP 0.1ml
5HT3C 英文名稱: 5-羥色胺受體3C抗體 0.1ml
eEF1A1 英文名稱: 翻譯延伸因子EF-1a抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-MAPK14(Thr180) 磷酸化p38MAPK抗體 規(guī)格 0.1ml
NIK,NF-kappaB-Inducing Kinase NFkB誘導的激酶(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg