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          目錄:上海貝博生物科技有限公司>>蛋白質(zhì)生物學(xué)>>蛋白提取和裂解>> 絲狀真菌線粒體蛋白提取試劑盒

          絲狀真菌線粒體蛋白提取試劑盒
          • 絲狀真菌線粒體蛋白提取試劑盒
          參考價(jià) 面議
          具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
          參考價(jià) 面議
          具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
          • 品牌 貝博生物
          • 型號(hào)
          • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
          • 所在地
          屬性

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          更新時(shí)間:2024-11-24 16:03:15瀏覽次數(shù):64評(píng)價(jià)

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          產(chǎn)品概述 product description 貝博® BBproExtra® 絲狀真菌線粒體蛋白提取試劑盒提供全套試劑,適用于從各種絲狀真菌樣本中提取線粒體蛋白。提取過程簡單方便。制備的線粒體蛋白不僅純度高,保持天然活性,而且絕少交叉污染。 本試劑盒含有的配方能夠有效溶解線粒體膜組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物,阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解,為提取高純度的蛋白提供了保證。 本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。 本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。
          保存溫度
          2-8℃
          注意事項(xiàng)
          1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲(chǔ)存。開蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。
          2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài),從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴,變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
          3.試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完!
          有效期
          一年
          檢測方法
          WB,IP等
          適用樣本
          絲狀真菌
          產(chǎn)品特點(diǎn)
          1.使用方便,從細(xì)胞,組織中提取蛋白不需經(jīng)過研磨、反復(fù)凍融、超聲破碎等前處理。
          2.將蛋白提取的時(shí)間縮短至30分鐘-1小時(shí)。
          3.含蛋白穩(wěn)定劑,提取的蛋白穩(wěn)定。
          4.紫外檢測蛋白濃度時(shí),背景干擾低。
          5.蛋白提取液含多種有效成分,可以充分釋放胞漿蛋白、核蛋白,又可結(jié)合釋出的蛋白防止沉淀。
          6.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64,每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
          產(chǎn)品應(yīng)用
          WB,IP等
          儀器準(zhǔn)備
          1.離心機(jī)
          2.振蕩器
          3.渦旋混勻器
          4.移液器
          5.冰箱
          6.冰盒
          試劑準(zhǔn)備
          1.PBS緩沖液
          2.蛋白定量試劑盒
          耗材準(zhǔn)備
          1.離心管
          2.吸頭
          3.一次性手套
          使用注意事項(xiàng)
          使用注意事項(xiàng):
          ? 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心,將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底,避免開蓋時(shí)液體灑落。
          ? 蛋白酶抑制劑在2-8℃時(shí)是固體狀態(tài),從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴,變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
          ? 實(shí)驗(yàn)過程中的所有試劑須預(yù)冷;所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過程須保持樣品處于低溫。
          ? 蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀,不影響使用,溶解后正常使用。
          ? 如果試劑盒不能短時(shí)間內(nèi)用完,蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
          ? 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
          ?
          使用方法
          1. 提取液準(zhǔn)備:
          根據(jù)樣本數(shù)量,每500ul冷的蛋白提取液B中加入2ul蛋白酶抑制劑混合物,混勻后置冰上備用。
          2. 取500mg-1g絲狀真菌樣本,用PBS洗一次。離心收集菌體沉淀。
          3. 在菌體中加入2ml提取液A后用勻漿機(jī)/Dounce勻漿器充分勻漿。
          4. 將勻漿液在500×g離心5分鐘,棄沉淀,收集上清。
          5. 將上清液在1000×g 離心5分鐘,棄沉淀,收集上清。
          6. 將上清液在2000×g 離心5分鐘,棄沉淀,收集上清。
          7. 將上清在11000×g離心20分鐘,棄上清,留沉淀。
          8. 在沉淀中加入100-400ul蛋白提取液B,充分混勻,在4℃條件下振蕩20-30分鐘,至無明顯沉淀。
          9. 在4℃,14000×g條件下離心15分鐘。
          10. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管,即可得到真菌線粒體蛋白。
          11. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

          常見問題分析
          1.蛋白濃度低?
          處理部分線粒體樣本時(shí)可能沒有裂解,導(dǎo)致蛋白濃度低。只要適當(dāng)延長試劑C的處理時(shí)間即可。在持續(xù)振蕩的條件下處理,沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。
          絲狀真菌線粒體蛋白較少,盡可能加大絲狀真菌樣品的上樣量。

          2.用什么方法定量蛋白?
          建議用BCA法。不適合用Bradford法,因?yàn)樵噭〢中含有干擾Bradford法的組份,導(dǎo)致定量不準(zhǔn)。如果已經(jīng)進(jìn)行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系,則可以用Bradford法定量。

          3.提取的蛋白具有活性嗎?
          本試劑盒不含有離子型去垢劑組份,不破壞蛋白的結(jié)構(gòu),沒有對(duì)蛋白質(zhì)之間原有的相互作用的破壞,蛋白均保持其天然構(gòu)象和活性。
          參考文獻(xiàn)
          1.Yuhan Xiao, et al.
          Transcription factor MoMsn2 targets the putative 3‐methylglutaconyl‐CoA hydratase‐encoding gene MoAUH1 to govern infectious growth via mitochondrial fusion/fission balance in Magnaporthe oryzae
          Environmental Microbiology 2020 (IF=5.147)

          2.Lei Chen, et al.
          Cinnamaldehyde inhibits Candida albicans growth by causing apoptosis and its treatment on vulvovaginal candidiasis and oropharyngeal candidiasis
          Applied Microbiology and Biotechnology 2019 (IF=3.67)

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