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          目錄:上海貝博生物科技有限公司>>蛋白質(zhì)生物學(xué)>>蛋白提取和裂解>> 細(xì)菌胞質(zhì)蛋白提取試劑盒

          細(xì)菌胞質(zhì)蛋白提取試劑盒
          • 細(xì)菌胞質(zhì)蛋白提取試劑盒
          參考價(jià) 面議
          具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
          參考價(jià) 面議
          具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
          • 品牌 貝博生物
          • 型號(hào)
          • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
          • 所在地
          屬性

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          更新時(shí)間:2024-11-24 16:42:07瀏覽次數(shù):65評(píng)價(jià)

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          更多產(chǎn)品
          產(chǎn)品概述 product description 貝博® BBproExtra® 細(xì)菌胞質(zhì)蛋白提取試劑盒可以從各種菌體中提取胞質(zhì)蛋白,包括革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌。提取過程簡(jiǎn)單方便。本試劑盒含有的配方能夠有效裂解細(xì)菌組份,試劑盒含有蛋白酶抑制劑混合物,阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解,為提取高質(zhì)量的蛋白提供了保證。 本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測(cè)定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。 本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。 本試劑盒中不含有EDTA,與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。
          保存溫度
          2-8℃
          注意事項(xiàng)
          1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲(chǔ)存。開蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。
          2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài),從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴,變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
          3.試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完!
          有效期
          一年
          檢測(cè)方法
          WB,IP等
          適用樣本
          細(xì)菌
          產(chǎn)品特點(diǎn)
          1.使用方便,從細(xì)菌中提取蛋白不需經(jīng)過超聲破碎等前處理。
          2.含蛋白穩(wěn)定劑,提取的蛋白穩(wěn)定。
          3.紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí),背景干擾低。
          4.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑;每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
          5.本品可用于革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌。
          6.本品不含EDTA,可以用于金屬螯合層析等下游應(yīng)用。
          產(chǎn)品應(yīng)用
          WB,IP等
          儀器準(zhǔn)備
          1.離心機(jī)
          2.振蕩器
          3.渦旋混勻器
          4.移液器
          5.冰箱
          6.冰盒
          試劑準(zhǔn)備
          1.PBS緩沖液
          2.蛋白定量試劑盒
          耗材準(zhǔn)備
          1.離心管
          2.吸頭
          3.一次性手套
          使用注意事項(xiàng)
          使用注意事項(xiàng):
          ? 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心,將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底,避免開蓋時(shí)液體灑落。
          ? 蛋白酶抑制劑在2-8℃時(shí)是固體狀態(tài),從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴,變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
          ? 實(shí)驗(yàn)過程中的所有試劑須預(yù)冷;所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過程須保持樣品處于低溫。
          ? 蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀,不影響使用,溶解后正常使用。
          ? 如果試劑盒不能短時(shí)間內(nèi)用完,蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
          ? 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
          ? 下游實(shí)驗(yàn)如果是進(jìn)行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測(cè),提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑,注意提取過程保持低溫操作,縮短離心時(shí)間。
          使用方法
          1. 提取液制備:
          每500ul冷的提取液A中加入5ul提取液B 和2ul蛋白酶抑制劑混合物,充分混勻后置冰上備用。
          2. 離心收集需要提取蛋白的菌體,用PBS洗菌體2次。
          3. 按每100-150mg濕重菌體樣本加入500ul冷的提取液A(大約菌體和提取液體積比1:3-1:5,淹沒菌體即可),吹打混勻,在2-8℃振蕩1-2小時(shí),至菌體裂解,菌體沉淀減少。
          4. 將菌液在2-8℃低溫下12000g離心5分鐘,取上清。
          5. 在37℃水浴10分鐘。
          6. 在37℃, 1000g離心3分鐘。
          7. 此時(shí)液體分為2層,小心吸取上層溶液,即為胞質(zhì)蛋白。
          8. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。
          常見問題分析

          1.蛋白濃度低?
          細(xì)菌蛋白豐度較低,需要盡可能加大細(xì)胞上樣量。處理部分樣本時(shí)可能沒有裂解,導(dǎo)致蛋白濃度低。只要適當(dāng)延長(zhǎng)試劑A的處理時(shí)間即可。在持續(xù)振蕩的條件下處理,沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。
          2.用什么方法定量蛋白?
          建議用BCA法。不適合用Bradford法,因?yàn)樵噭〢中含有干擾Bradford法的組份,導(dǎo)致定量不準(zhǔn)。如果已經(jīng)進(jìn)行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系,則可以用Bradford法定量。
          3.提取的蛋白具有活性嗎?
          本試劑盒不含有離子型去垢劑組份,不破壞蛋白的結(jié)構(gòu),沒有對(duì)蛋白質(zhì)之間原有的相互作用的破壞,蛋白均保持其天然構(gòu)象和活性。
          參考文獻(xiàn)
          1.Gang Zhou, Qing-shan Shi, et al.
          Proteome responses of Citrobacter werkmanii BF-6 planktonic cells and biofilms to calcium chloride
          Journal of Proteomics Volume 133, 5 February 2016, P134–143 (IF=3.888)

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