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          目錄:上海貝博生物科技有限公司>>蛋白質生物學>>蛋白提取和裂解>> 昆蟲蛋白提取試劑盒（pull-down、co-IP等）
          
		
          
	
          
    	
          
		
          
			
          昆蟲蛋白提取試劑盒（pull-down、co-IP等）
          
		
          
		
          
			
		
          
	
          
	
          
		
          
			
          
           				    
            
			        
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			                昆蟲蛋白提取試劑盒（pull-down、co-IP等）
			            
            
			        
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                      產(chǎn)品概述                                 product description                                                                                                                              貝博® BBproExtra®   昆蟲組織蛋白提取試劑盒適用于從各種昆蟲類細胞、組織中提取總蛋白。提取過程簡單方便，可在1小時內完成。   本試劑盒含有的配方能夠有效溶解細胞膜組份，包括細胞質膜、核膜和各種細胞器膜。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。   本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質電泳、免疫沉淀、ELISA、轉錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。   本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白。   本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應用兼容。
					
          
					
					
                               
                                   
                                       保存溫度                         
                                   
                                       2-8℃                         
                               
                           
                                                                           
                               
                                   
                                       注意事項                         
                                   
                                       1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。
          2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
          3.試劑拆封后請盡快使用完！
                                   
                               
                           
                                                                           
                               
                                   
                                       有效期                         
                                   
                                       一年                         
                               
                           
                                                                           
                               
                                   
                                       檢測方法                         
                                   
                                       Pull-down、co-IP等                           
                               
                           
                                                                           
                               
                                   
                                       適用樣本                         
                                   
                                       昆蟲                         
                               
                           
                                                                           
                               
                                   
                                       產(chǎn)品特點                         
                                   
                                       1.使用方便，從昆蟲類細胞，組織中提取蛋白不需經(jīng)過研磨、反復凍融、超聲破碎等前處理。
          2.將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。
          3.含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
          4.紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。
          5.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
                                   
                               
                           
                                                                           
                               
                                   
                                       產(chǎn)品應用                         
                                   
                                       Pull-down、co-IP等                           
                               
                           
                                                                           
                               
                                   
                                       儀器準備                         
                                   
                                       1.離心機
          2.振蕩器
          3.勻漿機/勻漿器
          4.渦旋混勻器
          5.移液器
          6.冰箱
          7.冰盒                          
                               
                           
                                                                           
                               
                                   
                                       試劑準備                         
                                   
                                       1.PBS緩沖液 
          2.蛋白定量試劑盒                         
                               
                           
                                                                           
                               
                                   
                                       耗材準備                         
                                   
                                       1.離心管
          2.吸頭
          3.一次性手套                         
                               
                           
                                                                           
                               
                                   
                                       使用注意事項                         
                                   
                                        使用注意事項：
          ? 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
          ? 蛋白酶抑制劑在2-8℃時是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
          ? 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
          ? 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
          ? 如果試劑盒不能短時間內用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
          ? 可以根據(jù)自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
          ? 下游實驗如果是進行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測，提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑，注意提取過程保持低溫操作，縮短離心時間。
                                   
                               
                           
                                                                           
                               
                                   
                                       使用方法                         
                                   
                                       1. 提取液制備：
          每500ul冷的昆蟲蛋白提取液中加入2ul蛋白酶抑制劑混合物，4ul蛋白穩(wěn)定劑，混勻后置冰上備用。
          2. 取50-100mg昆蟲組織樣本剪碎，加入500ul昆蟲蛋白提取液。
          3. 用勻漿機/勻漿器充分勻漿。
          4. 將勻漿在4℃條件下振蕩20-30分鐘。
          5. 在4℃，12000×g條件下離心10分鐘。
          6. 將上清吸入另一預冷的干凈離心管，即可得到昆蟲總蛋白。
          7. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌嶒灐?br>

                                   
                               
                           
                                                                           
                               
                                   
                                       常見問題分析                         
                                   
                                       1.蛋白濃度低？
          處理部分組織樣本時可能沒有裂解，導致蛋白濃度低。只要適當延長試劑A的處理時間即可。在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。
          2.用什么方法定量蛋白？
          建議用BCA法。不適合用Bradford法，因為試劑A中含有干擾Bradford法的組份，導致定量不準。如果已經(jīng)進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。
          3.提取時出現(xiàn)膠狀沉淀？
          蛋白提取液處理產(chǎn)物中有時會出現(xiàn)少量透明膠狀物，屬正常現(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復合物。不檢測和基因組DNA結合特別緊密的特定蛋白的情況下，可以直接離心取上清進行后續(xù)實驗即可；如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理，300w/10秒間隔10秒，超聲3分鐘，隨后離心取上清用于后續(xù)實驗。檢測一些常見的轉錄因子，例如NF-kappaB、p53等時，不必進行超聲處理。
          4.提取的蛋白具有活性嗎？
          本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結構，沒有對蛋白質之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構象和活性。
                                   
                               
                           
                                                                                       
          

                                                                                    				
          

			
          
		
          
	
          
	
          
	
	
	 		 
	
          
		
          
			
          
				
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