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          目錄:上海貝博生物科技有限公司>>蛋白質生物學>>蛋白提取和裂解>> 細胞核蛋白提取試劑盒

          細胞核蛋白提取試劑盒
          • 細胞核蛋白提取試劑盒
          參考價 面議
          具體成交價以合同協(xié)議為準
          參考價 面議
          具體成交價以合同協(xié)議為準
          • 品牌 貝博生物
          • 型號
          • 廠商性質 生產商
          • 所在地 上海市
          屬性

          供貨周期:現(xiàn)貨 應用領域:生物產業(yè)

          >

          更新時間:2024-11-24 18:42:53瀏覽次數(shù):114評價

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          供貨周期 現(xiàn)貨 應用領域 生物產業(yè)
          貝博® BBproExtra® 細胞核蛋白提取試劑盒提供全套試劑,適用于從各種原代或傳代動物細胞等動物細胞中提取核蛋白。提取過程簡單方便,可在1小時內完成。制備的核蛋白和胞漿蛋白不僅純度高,保持天然活性,而且絕少交叉污染。本試劑盒含有的配方能夠有效溶解細胞核膜組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物,阻止了蛋白酶對蛋白的降解,為提取高純度的蛋白提供了保證。

          貝博® BBproExtra® 細胞核蛋白提取試劑盒提供全套試劑,適用于從各種原代或傳代動物細胞等動物細胞中提取核蛋白。提取過程簡單方便,可在1小時內完成。制備的核蛋白和胞漿蛋白不僅純度高,保持天然活性,而且絕少交叉污染。本試劑盒含有的配方能夠有效溶解細胞核膜組份。

          細胞核蛋白提取試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物,阻止了蛋白酶對蛋白的降解,為提取高純度的蛋白提供了保證。本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、轉錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實驗、免疫共沉淀、酶活性測定等蛋白研究。如果下游應用是金屬螯和層析等不能含EDTA試劑的實驗,可以聯(lián)系貝博更換不含EDTA的蛋白酶抑制劑混合物。本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白。

          保存溫度

          2-8℃
          注意事項
          1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。
          2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態(tài),從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴,變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
          3.試劑拆封后請盡快使用完!

          有效期

          一年

          檢測方法
          WB,IP等
          適用樣本
          動物細胞
          產品特點
          1.使用方便,從細胞,組織中提取蛋白不需經過研磨、反復凍融、超聲破碎等前處理。
          2.提取過程簡單方便。
          3.含蛋白穩(wěn)定劑,提取的蛋白穩(wěn)定。
          4.紫外檢測蛋白濃度時,背景干擾低。
          5.蛋白提取液含多種有效成分,可以充分釋放胞漿蛋白和膜蛋白,又可結合釋出的蛋白防止沉淀。

          6.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64,每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,包括蛋白酶、半蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

          產品應用

          WB,IP等
          儀器準備
          1.離心機
          2.振蕩器
          3.勻漿機/勻漿器
          4.渦旋混勻器
          5.移液器
          6.冰箱
          7.冰盒
          試劑準備
          1.PBS緩沖液
          2.蛋白定量試劑盒
          耗材準備
          1.離心管
          2.吸頭
          3.一次性手套
          使用注意事項:
          旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋內壁上的液體甩至管底,避免開蓋時液體灑落。
          蛋白酶抑制劑在2-8℃時是固體狀態(tài),從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴,變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
          實驗過程中的所有試劑須預冷;所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
          蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀,不影響使用,溶解后正常使用。
          如果試劑盒不能短時間內用完,蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
          可以根據(jù)自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
          下游實驗如果是進行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測,提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑,注意提取過程保持低溫操作,縮短離心時間。
          使用方法                        
          細胞核蛋白提取
          1.提取液制備:
          每200ul冷的蛋白提取液A加入1ul蛋白酶抑制劑混合物和1ul磷酸酶抑制劑。 每200ul冷的蛋白提取液B中加入1ul蛋白酶抑制劑混合物和1ul磷酸酶抑制劑,混勻后置冰上備用。
          2.收集細胞。
          3.用冷PBS洗滌細胞兩次,每次洗滌后盡可能吸干上清。
          4.每20ul細胞壓積(細胞沉淀體積)中加入100-200μl冷的提取液 A,充分吹打混勻,置2-8℃條件振蕩15-30分鐘。
          5.再次混勻,然后在4℃,10000×g條件下離心5分鐘。
          6.將上清吸入另一預冷的干凈離心管,即可得到胞漿蛋白,請置于冰上或-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?br/>7.沉淀用PBS洗滌一次,在4℃,5000×g條件下離心5分鐘,棄上清,留沉淀。
          8.在沉淀中加入80-200μl冷的提取液B,高速渦旋振蕩15秒。
          9.置2-8℃條件振蕩30-40分鐘。
          10.在4℃,12000×g條件下離心10分鐘。
          11.將上清吸入另一預冷的干凈離心管,即可得到核蛋白。
          12.將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌嶒灐?br/>                        
          常見問題分析                        
          1.核蛋白濃度低?
          核蛋白豐度較低,需要足夠細胞數(shù)量提取,在條件允許的情況下,盡可能加大細胞量。
          注意用蛋白提取液B處理時沒有裂解,導致蛋白濃度低。只要適當延長試劑B的處理時間即可。在持續(xù)振蕩的條件下處理,沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻,至無明顯沉淀。
          如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白,則需要采用超聲處理。

          2.用什么方法定量蛋白?
          建議用BCA法。不適合用Bradford法,因為試劑A中含有干擾Bradford法的組份,導致定量不準。如果已經進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系,則可以用Bradford法定量。

          3.提取的蛋白具有活性嗎?
          本試劑盒不含有離子型去垢劑組份,不破壞蛋白的結構,沒有對蛋白質之間原有的相互作用的破壞,蛋白均保持其天然構象和活性。
                                 
          參考文獻                        
          1.Pingli Li et al.
          Preparation and in vitro immunomodulatory effect of curdlan sulfate
          Carbohydrate Polymers    2014    (IF=7.182)

          2.Guang Yu et al.        
          Ser9 phosphorylation causes cytoplasmic detention of I2PP2A/SET in Alzheimer disease
          Neurobiology of Aging     2013    (IF=6.189)

          3.Wan Li et al.        
          Anti-inflammatory effects of Morchella esculenta polysaccharide and its derivatives in fine particulate matter-treated NR8383 cells
          International Journal of Biological Macromolecules     2019    (IF=5.162)

          4.Mengjuan Wu et al.        
          Phosphorylation of SET mediates apoptosis via P53 hyperactivation and NM23-H1 nuclear import
          Neurobiology of Aging        2018     (IF=5.117)

          5.Xiaoling Ma et al.        
          Staphylococcal Panton-Valentine Leukocidin Induces Pro-Inflammatory Cytokine Production and Nuclear Factor-Kappa B Activation in Neutrophils
          PloS one        2012      (IF=4.411)

          6.Jinchun Qian et al.        
          Ophiopogonin D prevents H2O2-induced injury in primary human umbilical vein endothelial cells
          Journal of Ethnopharmacology     2010     (IF=3.69)

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