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          目錄:上海貝博生物科技有限公司>>蛋白質(zhì)生物學(xué)>>蛋白提取和裂解>> 胞質(zhì)蛋白提取試劑盒

          胞質(zhì)蛋白提取試劑盒
          • 胞質(zhì)蛋白提取試劑盒
          參考價 面議
          具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
          參考價 面議
          具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
          • 品牌 貝博生物
          • 型號
          • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
          • 所在地
          屬性

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          更新時間:2024-11-24 18:46:45瀏覽次數(shù):117評價

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          產(chǎn)品概述 product description 貝博® BBproExtra® 胞漿蛋白提取試劑盒提供全套試劑,適用于從細(xì)胞和動物組織制備胞漿蛋白。提取過程簡單方便,可在1小時內(nèi)完成。制備的胞漿蛋白不僅純度高,保持天然活性,而且絕少交叉污染。 本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。 本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白,下游應(yīng)用范圍廣,提取液裂解細(xì)胞的能力較溫和,需要根據(jù)實(shí)際樣本情況優(yōu)化裂解時間。 本試劑盒中不含有EDTA,與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。
          保存溫度
          2-8℃
          注意事項(xiàng)
          1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。
          2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態(tài),從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時間水浴,變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
          3.試劑拆封后請盡快使用完!
          有效期
          一年
          檢測方法
          WB,IP等
          適用樣本
          動物細(xì)胞/組織
          產(chǎn)品特點(diǎn)
          1.使用方便,從細(xì)胞,組織中提取蛋白不需經(jīng)過研磨、反復(fù)凍融、超聲破碎等前處理。
          2.提取過程簡單方便。
          3.含蛋白穩(wěn)定劑,提取的蛋白穩(wěn)定。
          4.紫外檢測蛋白濃度時,背景干擾低。
          5.蛋白提取液含多種有效成分,可以充分釋放胞漿蛋白和膜蛋白,又可結(jié)合釋出的蛋白防止沉淀。
          6.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64,每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,包括蛋白酶、半蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
          產(chǎn)品應(yīng)用
          WB,IP等
          儀器準(zhǔn)備
          1.離心機(jī)
          2.振蕩器
          3.勻漿機(jī)/勻漿器
          4.渦旋混勻器
          5.移液器
          6.冰箱
          7.冰盒
          試劑準(zhǔn)備
          1.PBS緩沖液
          2.蛋白定量試劑盒
          耗材準(zhǔn)備
          1.離心管
          2.吸頭
          3.一次性手套
          使用注意事項(xiàng)
          使用注意事項(xiàng):
          ? 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底,避免開蓋時液體灑落。
          ? 蛋白酶抑制劑在2-8℃時是固體狀態(tài),從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時間水浴,變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
          ? 實(shí)驗(yàn)過程中的所有試劑須預(yù)冷;所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
          ? 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀,不影響使用,溶解后正常使用。
          ? 如果試劑盒不能短時間內(nèi)用完,蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
          ? 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
          ? 下游實(shí)驗(yàn)如果是進(jìn)行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測,提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑,注意提取過程保持低溫操作,縮短離心時間。
          使用方法
          細(xì)胞胞質(zhì)蛋白提取
          1. 提取液制備:
          每500ul冷的胞漿蛋白提取液A加入2ul蛋白酶抑制劑混合物和2ul磷酸酶抑制劑,充分混勻。
          2. 取5-10×106個細(xì)胞,在4℃,500×g力條件下離心5分鐘,小心吸取培養(yǎng)基,盡可能吸干,收集細(xì)胞。
          3. 用冷PBS洗滌細(xì)胞兩次,每次洗滌后盡可能吸干上清。
          4. 每20ul細(xì)胞壓積(細(xì)胞沉淀體積,約20mg,2×106個細(xì)胞)中加入150-200μl冷的提取液 A,高速渦旋振蕩混勻或吹打混勻,置2-8℃條件振蕩20-30分鐘。
          5. 然后在4℃,12000×g條件下離心10分鐘。
          6. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管,即可得到胞質(zhì)蛋白。
          7. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

          組織胞質(zhì)蛋白提取
          1. 提取液制備:
          每500ul冷的胞漿蛋白提取液A加入2ul蛋白酶抑制劑混合物和2ul磷酸酶抑制劑,充分混勻。
          2. 取適量組織樣本用刀盡可能剪碎,每20mg組織中加入150-200μl冷的提取液 A,用組織勻漿器勻漿至無明顯肉眼可見固體。
          3. 將勻漿液吸出,置2-8℃條件振蕩20-30分鐘。
          4. 再次高速渦旋振蕩5秒,然后在4℃,12000×g力條件下離心10分鐘。
          5. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管,即可得到胞質(zhì)蛋白。
          6. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。
          常見問題分析
          1.細(xì)胞裂解速度慢?
          為了充分保證提取得到的蛋白的活性,提取液采用的保護(hù)蛋白的配方,裂解能力溫和,下游應(yīng)用范圍廣。適當(dāng)延長裂解的時間即可。
          2.蛋白濃度低?
          處理部分樣本時可能沒有裂解,導(dǎo)致蛋白濃度低。只要適當(dāng)延長試劑A的處理時間即可。在持續(xù)振蕩的條件下處理,沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。
          3.用什么方法定量蛋白?
          建議用BCA法。不適合用Bradford法,因?yàn)樵噭〢中含有干擾Bradford法的組份,導(dǎo)致定量不準(zhǔn)。如果已經(jīng)進(jìn)行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系,則可以用Bradford法定量。

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