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2-8℃避光

1.長期不用可以-20℃保存。
2.染色液避免反復(fù)凍融。多次凍融會導(dǎo)致失效。
3.染色液需要長期保存時可以根據(jù)使用情況進(jìn)行小量分裝后-20℃保存。
4.試劑拆封后請盡快使用完！

一年

酶標(biāo)儀

細(xì)菌

1.使用方便：僅使用單一試劑；
2.靈敏度高，數(shù)據(jù)可靠，重現(xiàn)性好，線性范圍更寬；
3.結(jié)果穩(wěn)定：試劑本身穩(wěn)定性高，實驗結(jié)果穩(wěn)定可靠；
4.無需放射性同位素和有機(jī)溶劑，對微生物毒性低；
5.適合于高通量藥物篩選。

酶標(biāo)儀

1.帶有450nm濾光片的酶標(biāo)儀
2.CO2培養(yǎng)箱
3.離心機(jī)
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒

1.PBS 2.HBSS

1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套
4.96孔培養(yǎng)板

1.旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
2.需長時間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融，否則將會增加空白吸收，從而影響檢測結(jié)果。小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。
3.正式實驗前，建議先做幾個孔摸索接種細(xì)菌的數(shù)量和加入MTS試劑后的培養(yǎng)時間。培養(yǎng)時間一般在1-4小時。
4.部分藥物可能對檢測有影響，有影響時需去除藥物后再檢測，無影響時直接檢測。用培養(yǎng)基或PBS來配制待檢測藥物，加入MTS試劑，測藥物溶液在450 nm處的吸光度。如果該吸光度與不含藥物僅加MTS試劑的培養(yǎng)基或PBS吸光度差異不大，則可以直接加入MTS，如果吸光度相對較大，則需要除去培養(yǎng)基，并用新鮮培養(yǎng)基洗滌菌體兩次，然后加入新的100μl培養(yǎng)基和10μl MTS進(jìn)行檢測。
5.接種時注意菌液一定要混勻，以避免菌體沉淀下來，導(dǎo)致每孔中的細(xì)胞數(shù)量不等，可以每接種幾個孔就混勻一下。培養(yǎng)板周圍一圈孔培養(yǎng)基容易揮發(fā)，為了減少誤差，建議培養(yǎng)板的四邊每孔只加培養(yǎng)基，而不作為指標(biāo)檢測孔。
6.細(xì)胞接種數(shù)量的選擇，可以用不同的細(xì)胞數(shù)接種，然后加入MTS試劑，1小時，2小時，3小時檢測450nm 以O(shè)D值1.0左右為標(biāo)準(zhǔn)選擇細(xì)胞數(shù)。
7.有條件的情況下建議采用多通道移液器，可以減少平行孔間的差異。加 MTS試劑時，建議斜貼著培養(yǎng)板壁加，不要插到培養(yǎng)基液面下加，容易產(chǎn)生氣泡，會干擾O.D值讀數(shù)。
8.如果不是使用96孔板檢測，MTS溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可。
9.本試劑盒用于細(xì)菌的檢測，不可用于酵母檢測。
10.MTS試劑加樣量較小時，也可以用培養(yǎng)基稀釋MTS試劑后加樣以減小誤差。
11.本試劑無細(xì)胞毒性，可以在檢測后進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，也可以再進(jìn)行其他檢測。
12.某些實驗中吸光度值太高，可以減少細(xì)胞數(shù)量，或者縮短加入MTS后的培養(yǎng)時間。
13.如果OD值偏低，可以適當(dāng)增加細(xì)胞數(shù)量或延長加入MTS后的培養(yǎng)時間。
14.接種細(xì)胞時要充分重懸，接種均勻。細(xì)胞是否接種均勻?qū)Y(jié)果影響較大。
15.OD值在0.5-2.0之間均可，值控制在1.0左右，小于0.5或大于2.0請調(diào)整接種量和培養(yǎng)時間。
16.如果細(xì)胞數(shù)據(jù)出現(xiàn)異常增加，或者數(shù)據(jù)結(jié)果的方向相反等問題，可能是實驗中產(chǎn)生了氣泡、鋪板不均勻等操作問題，請重復(fù)實驗。

1. 制備適當(dāng)濃度微生物細(xì)胞的懸液，在96孔板內(nèi)每孔接種190μl懸液。
2. 每孔加入10μl的染色溶液。
3. 將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)（37℃或合適的溫度）。
4. 用酶標(biāo)儀測定在450nm處的吸光度。

細(xì)胞活力計算：
各重復(fù)孔的OD值取平均數(shù)。
細(xì)胞活力% =（測試孔OD-空白OD/對照孔OD-空白OD）×100