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及三重串聯(lián)四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀用于豬肉中 b2 受體激動劑的檢測
閱讀：476 發(fā)布時間：2022-9-20前言b2 受體激動劑是一種在肉類生產(chǎn)中違法使用的生長促進(jìn)劑，能提高瘦肉率。它們是一種代謝調(diào)節(jié)劑，能將通常用于產(chǎn)生脂肪的能量轉(zhuǎn)換成產(chǎn)生瘦肉的能量。最近，由于豬肉中高濃度 b2 受體激動劑(瘦肉精)導(dǎo)致的中毒事件時有發(fā)生。本應(yīng)用使用安捷倫 Bond ElutPlexa PCX SPE 柱從豬肉中提取和富集 11 種 b2 受體激動劑，然后用 LC-MS/MS 進(jìn)行定量分析。表 1 是 11 種 b2 受體激動劑的化合物名和結(jié)構(gòu)。
實驗試劑和化學(xué)品所有試劑都是質(zhì)譜、液相色譜或分析純級別。乙腈和水購自 Honeywell。標(biāo)準(zhǔn)品購自中國藥品生物制品檢定所(NICPBP)。豬肉購自當(dāng)?shù)爻?。?biāo)準(zhǔn)溶液 (1.0 mg/mL) 用甲醇分別配制，并儲存在–20 °C?；旌瞎ぷ魅芤?(10 µg/mL) 用乙腈/水(10:90)配制并儲存在 4 °C 的條件下。加標(biāo)溶液每周用混合工作溶液加適量水新鮮配制。儀器和材料安捷倫 1200 高效液相色譜儀安捷倫 6460 三重串聯(lián)四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀安捷倫 Bond Elut Plexa PCX 萃取柱，60 mg，3 mL (p/n 12108603)安捷倫 Poroshell 120 EC-C18 窄徑柱，2.1 × 100 mm，2.7 µm (p/n695775-902)安捷倫 Vac Elut 20 Manifold (p/n 12234101)
樣品制備液-液萃取稱取 5 克豬肉樣品(±0.01 g)，放入 50 mL 帶蓋的聚丙烯管中。加入 20 mL 的 0.2 M 醋酸鈉 (pH 5.2) 溶液，渦旋混勻。然后加入250 µL b-葡萄糖醛酸酶(1000 U/mL)，渦旋振蕩 2 分鐘*混勻樣品，然后置于 37 °C 下反應(yīng) 16 小時。酶解物振蕩 15 分鐘，然后在 4000 rpm 下離心 10 分鐘，將 4 mL 上清液轉(zhuǎn)移至另一個離心管中。加入 0.1 M 的高氯酸溶液調(diào)節(jié) pH 至1 ± 0.3。在 4000 rpm 下離心 10 分鐘，將上清液轉(zhuǎn)移至另一只離心管中。用10M 氫氧化鈉溶液將 pH 調(diào)至 11。加入 10 mL 飽和氯化鈉溶液和 10 mL 異丙醇-乙酸乙酯 (60:40) 并振蕩 5 分鐘。在 4000 rpm 下離心 5 分鐘，將有機(jī)層小心地轉(zhuǎn)移至另一個離心管中。再次加入異丙醇-乙酸乙酯萃取，振蕩，離心并收集上清液，重復(fù)兩次，然后將所有的上清液合并。在 40 °C 下用氮氣吹干。殘留物用 5 mL 0.2 M 醋酸鈉 (pH 5.2) 復(fù)溶。所得樣品用于稍后的 SPE 純化。
固相萃取固相萃取的步驟見圖 1。安捷倫 Bond Elut Plexa PCX 萃取柱用3 mL 甲醇和 3 mL 水活化。將 5 mL 樣品溶液移到萃取柱上，通過重力作用（約 1 mL/min）通過萃取柱。然后用 2 mL 水和 2 mL 2%的甲酸溶液淋洗萃取柱。在最高真空度下維持 3 分鐘，使萃取柱*干燥。用 5 mL 5%的氨水甲醇溶液洗脫(流速 1 mL/min)。洗脫液用 40 °C 氮氣吹干。用 1 mL 含 0.1% 甲酸的 水/乙腈 (90:10) 溶液復(fù)溶。樣品通過渦旋振蕩和超聲使殘留物*溶解，然后用0.45 µm 膜過濾。樣品轉(zhuǎn)移至 1.5 mL 樣品管，并在 3000 轉(zhuǎn)下離心5 分鐘。上清液轉(zhuǎn)移至 2mL 色譜樣品瓶，用于分析。
結(jié)論本研究表明，安捷倫 Bond Elut Plexa PCX 可以被用于復(fù)雜基質(zhì)樣品，如豬肉中 b2 受體激動劑的高效純化和富集?；|(zhì)加標(biāo)樣品的b2 受體激動劑的回收率和重現(xiàn)性都滿足法規(guī)的要求。樣品的基質(zhì)效應(yīng)和雜質(zhì)含量都非常低，沒有影響各目標(biāo)化合物的定量分析。定量限 (LOQ) 遠(yuǎn)低于法規(guī)的最大殘留 (MRL)。[1,2]