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Cary 60紫外-可見分光光度計測定 4 °C 下微量DNA的純度
閱讀：529 發(fā)布時間：2022-10-12前言多年以來，紫外-可見分光光度計一直是生物技術領域中測定 DNA 純度和濃度的一項重要工具。該方法最早由 Warburg 和 Christian 在 1942 年開發(fā) 1，隨后由Sambrook 等人在 1989 年進行了優(yōu)化，使其可用于實驗室中簡便、快速的測定 2。分光光度法的主要優(yōu)點在于測定過程： 1) 簡便；2) 準確； 3) 不破壞樣品。這一方法可以節(jié)省時間而不損失數據質量，并且在測定過程中無需使用大體積的樣品或額外的耗材，從而帶來經濟效益。
在之前的文章中，我們介紹了安捷倫 Cary 50 紫外-可見分光光度計配置 Hellma（德國 Hellma GmbH & Co.）的Traycell 微量比色池紫外-可見在室溫下準確、可重現地測定微量 DNA 的方法 3。在本研究中，我們采用帶光纖探頭的Cary 60 紫外-可見分光光度計進行了方法擴展研究，在 4 °C以及普通實驗室環(huán)境光照條件下測定了小體積樣品。本方法使得用戶可以將儀器靠近樣品，而不是像傳統(tǒng)光譜方法那樣將樣品放入儀器中，從而能夠在很短的時間內完成分析。Cary 60 的光學設計使這一優(yōu)勢得以實現，它主要憑借其的高強度閃爍氙燈以及新型的電子器件，使系統(tǒng)能夠有效地監(jiān)控吸光度的微小變化而不受環(huán)境背景光的任何影響。本文深入討論了這一方法的主要優(yōu)點。
方法與結果將小牛胸腺 DNA 用純凈水（MilliQ）稀釋得到不同濃度的樣品，濃度范圍 0–50 µg/ml。配有光纖耦合器以及微探頭的 Cary 60, 如圖 1 所示。在Eppendorf 管中加入 150 µL 純凈水（MilliQ），將其讀數作為空白。由于分子生物學試劑通常保存于冷藏條件下，因此所有樣品直接從 4 °C 冰箱中取出并進行分析。
討論測定五個樣品所用的時間不到兩分鐘。傳統(tǒng)方法使用微量比色皿，需要等待樣品加熱至室溫，而且在每兩次測定間需要清洗微量比色皿?？傊?，使用 Cary 60 光纖系統(tǒng)可以顯著降低大約 80% 的分析時間，同時采用光纖技術不易受到樣品處理引起的潛在污染。使用微探頭可以獲得高精度的數據并大大縮短測定低溫樣品所需的時間，這表明 Cary 60是一種適于測定生物樣品（如 DNA）的簡便、快速且高性價比的系統(tǒng)。本方法可以輕松地直接擴展到其它樣品類型，例如可在 280 nm 處測定蛋白質
結論Cary 60 紫外-可見分光光度計是使用光纖采樣的理想儀器，它高強度閃爍氙燈可以提供靈敏度和重現性。本應用報告所展示的測定 DNA 樣品時的分析速度、結果重現性以及易用性證明了該儀器系統(tǒng)的強大優(yōu)勢。使用帶光纖的 Cary 60 分析生物樣品還具有如下優(yōu)點：• 可以直接測定高溫或低溫樣品（4 °C – 110 °C）而無需考慮冷凝的問題，如果使用比色皿則由于冷凝可能導致結果不正確或重現性不好• 樣品體積不受限制，可以低至 40 µL，也可以無限大• 無需購買昂貴的石英微量比色皿，更節(jié)省了清洗比色皿的時間• 使用反射探頭還可以分析固體、粉末或凝膠類樣品