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快速高分離度液相色譜配合紫外和四極桿質(zhì)譜
閱讀：346 發(fā)布時(shí)間：2023-2-8本應(yīng)用報(bào)告報(bào)道了使用 LC/MS 技術(shù)進(jìn)行中藥中七種常見(jiàn)減肥藥摻雜物的篩查和鑒定方法。該方法采用安捷倫快速高分離度液相色譜（RRLC）分離和UV檢測(cè)進(jìn)行色譜和光譜定性分析。單四極桿質(zhì)譜法用于定性和定量鑒定，并測(cè)定加標(biāo)樣品的回收率。研究的七個(gè)化合物均可產(chǎn)生 [M + H]+ 離子，這七個(gè)化合物的回收率在 60.9% 至106.3% 之間。本研究表明該方法準(zhǔn)確、可靠，可以作為一種通用的方法進(jìn)行中藥減肥藥和保健藥中摻雜物的篩查和確認(rèn)。
引言隨著人民生活水平的提高，肥胖正在成為一個(gè)社會(huì)問(wèn)題，減肥產(chǎn)品正成為流行的一類(lèi)保健品。由于減肥產(chǎn)品面向公眾且日益流行，對(duì)這些產(chǎn)品的安全性應(yīng)給予足夠的重視。一些中藥減肥藥或保健品制造商非法添加一些西藥制劑以提高治療效果。過(guò)度和長(zhǎng)期使用這些添加了西藥的中藥會(huì)對(duì)健康造成巨大的損害。因此，必須建立快速、可靠、靈敏的檢測(cè)方法進(jìn)行中藥減肥藥或保健品中摻雜物的檢測(cè)。安捷倫快速高分離度液相色譜（RRLC）使用亞 2 µm 填料技術(shù)，可有效地分離各個(gè)成分，在每次分析中更易于對(duì)廣泛的違禁成分進(jìn)行分析。由二極管陣列檢測(cè)器得到的紫外（UV）光譜信息也有助于準(zhǔn)確檢測(cè)目標(biāo)組分。除UV檢測(cè)器外，單四極桿質(zhì)譜由于其高靈敏度和更好的特異性正在成為一種快速、高效的通用檢測(cè)方法。本研究中，配備了二極管陣列檢測(cè)器（DAD）的安捷倫 RRLC 和單四極桿質(zhì)譜系統(tǒng)被用于六種中藥減肥保健品中摻雜物的分析。
實(shí)驗(yàn)部分儀器• Agilent 1200 系列 RRLC 系統(tǒng)，配備二元泵（低延遲體積配置）、脫氣機(jī)、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、二極管陣列檢測(cè)器。• Agilent 6130 四極質(zhì)譜儀，配備ESI離子源。RRLC 方法• 色譜柱：Agilent ZORBAX RRHDEclipse Plus C18 柱（(2.1 x 50 mm,1.8 µm) （部件號(hào) 959757-902）• 流動(dòng)相：A：水+ 0.2%甲酸B：乙腈• 梯度條件：0-0.8 min，5%B；0.3-4 min，5% - 65% 的B• 流速：0.4 mL/min• 進(jìn)樣量：2 µL• 柱溫：30 °C• 檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm• 停止時(shí)間：5 min• 后運(yùn)行時(shí)間：3 min質(zhì)譜方法• 極性：正• 毛細(xì)管電壓：3000V• 干燥氣：8 L/min• 霧化器：35 psi• 干燥氣溫度：350 °C• 碎裂電壓VRA化學(xué)品和溶劑• 甲醇，乙腈（色譜純，Dikmapure）• 甲酸（色譜純，Dikma 科技公司）• 純凈水（Mill-Q 系統(tǒng)生產(chǎn)的純凈水）• 七種標(biāo)準(zhǔn)品（參考物質(zhì)），包括鹽酸苯丙醇胺、氫氯噻嗪、鹽酸芬氟la明、酚酞和便塞停，所有這些藥品均購(gòu)自 NICPB（國(guó)家藥品生物制品檢定所）。• 六個(gè)待測(cè)樣品，DYX 減肥茶、BSY 減肥茶、GJL 減肥茶、YST 減肥茶、降脂片劑和 QM 減肥膠囊。所有這些樣品均為市售產(chǎn)品。
標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制一定量的氫氯噻嗪、苯丙醇胺、酚酞和便塞停加入一定量的甲醇，超聲溶解，轉(zhuǎn)移至50 mL 容量瓶，加甲醇定容，配制為儲(chǔ)備液。將儲(chǔ)備液用甲醇稀釋 10 倍，配制為紫外檢測(cè)工作液（約 20 µg/mL）。該工作液進(jìn)一步用甲醇稀釋 20 倍，配制為質(zhì)譜檢測(cè)工作液（約 1.0 µg/mL）。表 1 為各標(biāo)準(zhǔn)品的濃度。
膠囊內(nèi)容物：打開(kāi)膠囊，采用上述藥片的樣品制備方法進(jìn)行樣品制備。膠囊殼：膠囊殼稱重，研磨成粉末。將相當(dāng)于兩個(gè)膠囊殼重量的粉末轉(zhuǎn)移至 10 mL容量瓶，采用上述方法進(jìn)行樣品制備。回收率實(shí)驗(yàn)將標(biāo)準(zhǔn)品添加到兩個(gè)不同的陰性測(cè)試樣品（片劑和膠囊內(nèi)容物）中進(jìn)行加標(biāo)回收率考察。采用上述方法進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算 SIM 模式檢測(cè)條件下的加標(biāo)回收率。平行進(jìn)行了空白實(shí)驗(yàn)（兩個(gè)加標(biāo)樣品和兩個(gè)空白）。
結(jié)果與討論HPLC 分析含氮原子的化合物在甲酸存在的條件下能產(chǎn)生較好的正離子信號(hào)。這七種樣品有不同的結(jié)構(gòu)和疏水性，所以采用梯度洗脫進(jìn)行色譜分離。如圖 1 所示，檢測(cè)到的一些物質(zhì)的保留和分離獲得了令人滿意的結(jié)果。整個(gè)分離過(guò)程在 5 分鐘內(nèi)完成。與其它物質(zhì)的色譜峰相比，鹽酸苯丙醇胺、鹽酸芬氟la明和鹽酸西bu曲明的色譜峰在該流動(dòng)相條件下表現(xiàn)出一定展寬，這些是由于化合物的兩性官能團(tuán)導(dǎo)致的。
采用 2.1 mm 內(nèi)徑色譜柱和 0.4 mL/min的流速，不進(jìn)行分流也可進(jìn)行質(zhì)譜分析，并能采集到令人滿意的質(zhì)譜信號(hào)。因?yàn)樗鼪](méi)有采用如高濃度的鹽緩沖液等條件，該分析方法并沒(méi)有對(duì)柱效產(chǎn)生負(fù)面影響。即使進(jìn)樣 150 次以后，柱效也無(wú)明顯下降。
樣品分析• 在 DYX、YST、BSY 和 GJL 減肥茶和降脂片中檢測(cè)到了咖fei因。• 在 QM 減肥膠囊中檢測(cè)到了鹽酸西bu曲明（如產(chǎn)品包裝所示）。圖 6 和圖 9 的色譜圖表明，陽(yáng)性樣品中采用紫外和質(zhì)譜均可檢測(cè)到目標(biāo)化合物。DAD 紫外光譜可為目標(biāo)化合物的存在提供有用信息。因此，RRLC-UV 可用作目標(biāo)化合物快速篩查的工具。然而，對(duì)于組成成分復(fù)雜的樣品，采用單一的分離方法不容易將所有成分分離。采集到的 DAD 光譜由于不分離而發(fā)生了疊加。這時(shí)就需要采用質(zhì)譜或其它方法對(duì)某些成分進(jìn)行進(jìn)一步確認(rèn)。
在 DYX 減肥茶（0.6 mg/g，圖 4）、BSY 減肥茶 (0.37 mg/g, 圖 7)、GJL 減肥茶 (0.74 mg/g, 圖 10)、YST 減肥茶(0.94 mg/g, 圖 13)、降脂片 (1 mg/g,圖 16) 中均檢測(cè)到了咖fei因，含量均低于每日允許劑量。QM 減肥膠囊中檢測(cè)到的鹽酸西布qu明為每顆膠囊含鹽酸西布qu明 10.86 mg，產(chǎn)品包裝上標(biāo)示為每顆膠囊 10 mg。
結(jié)論結(jié)果表明單四極桿質(zhì)譜法是一種可用于中藥減肥藥和保健品中摻雜物篩查和鑒定的簡(jiǎn)單且易于使用的檢測(cè)工具。