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使用帶 UV 和 MS 檢測(cè)的高分離度快速液相色譜儀建立中藥制劑的可靠質(zhì)控方法
閱讀：421 發(fā)布時(shí)間：2023-5-20摘要 本應(yīng)用報(bào)告報(bào)導(dǎo)了采用帶紫外-可見和四極桿質(zhì)譜檢測(cè)器的高分離度快速液相色譜儀， 建立分析各種中藥(TCM)及中藥制劑的可靠質(zhì)控方法。比較了不同中藥的 UV 和 MS 檢測(cè)的色譜圖，并通過結(jié)合 UV 與 MS 圖譜鑒定目標(biāo)化合物。
前言 中國有著長(zhǎng)期使用中藥和中藥制劑的歷 史，對(duì)其療效有著豐富的經(jīng)驗(yàn)。然而， 一直以來質(zhì)量控制卻只是基于中草藥的 外觀。隨著新技術(shù)的發(fā)展，人們發(fā)現(xiàn)中 藥中含有成百上千種化合物，其濃度范 圍差異很大。而且，不同生長(zhǎng)地域、不 同采收時(shí)節(jié)，以及不同炮制和加工工藝， 都會(huì)影響中草藥的組分。因此，控制中 藥中化合物的質(zhì)量挑戰(zhàn)。由于特定 組分的中藥制劑常常包含多種中藥，所 以，現(xiàn)在只檢測(cè)中藥制劑中 1 種或 2 種 成分的方法已不足以控制其質(zhì)量。例如， 芪參益氣滴丸，一種用于治療冠心病的中藥，就包含以下四種中藥成分： • 黃芪(Astragali) • 丹參(Salviae miltiorrhizae) • 三七(Notoginseng) • 降香(Lignum dalbergine ordoriferae) 本研究以芪參益氣滴丸為樣品，用帶紫 外-可見和質(zhì)譜檢測(cè)的高分離度快速液相 色譜（RRLC），建立了一種對(duì)中藥進(jìn)行 質(zhì)量控制的新方法。本研究主要目的是 建立一種可靠的方法，檢測(cè)在加熱或混 合過程中不發(fā)生改變的潛在目標(biāo)化合物
實(shí)驗(yàn)部分 儀器 • Agilent 1200 系列高分離度快速液相 色譜系統(tǒng)，包含帶真空脫氣機(jī)的 SL 型 二元泵、SL 型柱溫箱和配置微量流通 池（2 µL 體積，3 mm 光程）的 SL 型二 極管陣列檢測(cè)器 • 配置 ESI 源的 Agilent 6140 四極桿質(zhì) 譜系統(tǒng) • 安捷倫化學(xué)工作站 B.02.01 SR1，用于 數(shù)據(jù)采集和處理 • Agilent ZORBAX SB-C18 RRHT 色譜 柱，3.0 x 50 mm，1.8 µm 粒徑 標(biāo)準(zhǔn)品 丹酚酸 B、丹參酮 I、丹參酮 IIA、隱丹參 酮、丹參素、三七皂甙 R1 和黃芪甲苷均 購自中國藥品生物制品檢定所（NICPBP）。 人參皂甙 Rg1、人參皂甙 Rb1、3,4-二羥基苯甲酸、人參皂甙 Re 和 人 參 皂 甙 Rc 購 自 美 國 SigmaAldrich 公司
溶劑 乙腈購自美國 Fisher 公司，水經(jīng) Milli-Q 純水系統(tǒng)制備。 樣品和樣品制備 芪參益氣滴丸、黃芪、丹參、三七中間體 提取物和降香揮發(fā)油由中國 TASLY 制藥 公司友情贈(zèng)送。中藥材購自當(dāng)?shù)刂兴幍辍?將滴丸、中藥提取物和中藥材溶解在 70%甲醇/水溶液中，超聲處理 30 分鐘， 用 0.22 µm 濾膜過濾。 RRLC 方法 • 流動(dòng)相： A：0.1% 甲酸的水溶液 B：0.1% 甲酸的乙腈溶液 • 梯度：0 分鐘，10% B；8 分鐘，38% B；12 分鐘，100% B；保持 3 分鐘， 然后至 10% B • 流速：1.0 mL/min (被動(dòng)分流器將進(jìn)入 MS 的流速降低至 0.4 mL/min) • 柱溫：45 °C • 檢測(cè)波長(zhǎng)：203 nm • 峰寬：0.5 s • 狹縫寬度：4 nm • 光譜：190-400 nm，步進(jìn) 2 nm MS 方法 • 掃描：80-1400 (正/負(fù)) • 碎裂電壓：70 (正/負(fù)) • 干燥氣：12 L/min • 霧化器壓力：50 psi • 干燥氣溫度：50 °C • 毛細(xì)管電壓：3200 V (正/負(fù))
結(jié)果與討論 用安捷倫方法轉(zhuǎn)換工具（可提供光盤，出 版號(hào) 5989-5130EN）將傳統(tǒng)液相色譜方 法轉(zhuǎn)為高分離度快速方法。 丹參、三七、黃芪和降香提取物的比較 圖 1 顯示，在 203 nm 下得到的丹參和三 七的色譜圖與混合提取物不同?；旌?和加熱后，某些色譜峰消失，并出現(xiàn)了一 些新色譜峰。 這說明，在質(zhì)控過程中對(duì)目標(biāo)化合物進(jìn)行 篩查是重要的一步，以確定該化合物在生 產(chǎn)過程中沒有改變。大多數(shù)研究人員采用 203 nm 進(jìn)行檢測(cè)，因?yàn)橹饕钚猿煞质?在 203 nm 有弱吸收的皂甙。但在 203 nm 下出現(xiàn)的幾個(gè)大峰可能都與質(zhì)量控制無 關(guān)，而小峰則可能對(duì)活性成分的研究更為 重要。因此，需要用靈敏度更高的檢測(cè)器 進(jìn)行補(bǔ)充檢測(cè)，以提供組分的更多信息。不同檢測(cè)器和條件的比較 圖 2 顯示了 UV 和 MS 檢測(cè)結(jié)果的差異。 質(zhì)譜總離子流色譜圖(TIC)中出現(xiàn)的峰更 多，因?yàn)槟承┙M分沒有 UV 吸收或吸收 很弱。采用 MS 檢測(cè)增加了另一方面的 信息，并且提供了不同化合物的更多結(jié) 構(gòu)信息。負(fù)極性模式給出了更完整的色 譜峰信息，可以對(duì)目標(biāo)化合物進(jìn)行質(zhì)控 鑒定。 芪參益氣滴丸和不同提取物的比較 圖 3 顯示了從三種提取物和其它添加劑 中制備的丹參、三七、黃芪和降香提取物， 以及芪參益氣滴丸的色譜圖。標(biāo)號(hào)的色譜 峰為該中藥制劑質(zhì)量控制掃描的目標(biāo)化合 物。根據(jù) UV 和 MS 數(shù)據(jù)，研究了不同色 譜峰，以確定這些化合物是否發(fā)生了改變。 表 1 列出了鑒定結(jié)果。
結(jié)論 本應(yīng)用報(bào)告報(bào)導(dǎo)了采用 UV 和 MS 檢測(cè)的 RRLC 方法，比目前藥典的質(zhì)量控制方法 更加可靠，因?yàn)樵摲椒梢愿鶕?jù) UV 和 MS 檢測(cè)器提供的信息追蹤中藥中幾種成 分的質(zhì)量。由于在生產(chǎn)和制備過程中這些 組分可能發(fā)生改變，所以追蹤這些組分非 常重要。用于質(zhì)譜檢測(cè)的 Agilent 6140 四 極桿質(zhì)譜使用簡(jiǎn)便，并能與 Agilent 1200 系列 RRLC 系統(tǒng)和安捷倫化學(xué)工作站軟件集成。
